Question

【題目】某化工廠土壤中含有大量的某種有毒化合物，為了從土壤中篩選出能夠將這種化合物分解的菌株，改良土壤，改變當地生態環境。科研人員進行如下實驗：

實驗原理：固體培養基中某有毒化合物在微生物的作用下溶解，會在菌落周圍形成透明圈（如下圖），透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物分解的能力大小。

實驗步驟：

步驟一取某地區土樣5g制得土壤溶液后稀釋，取稀釋液1mL接種到基礎培養基A上，在適宜溫度下培養72h。

步驟二在基礎培養基A上用接種環挑取代表性菌落再次接種，培養3~4d后觀察菌落特征和透明圈的大小，初步篩選出三種優良分解性能的菌株（如下表）。

菌株	透明圈直徑（D）	菌落直徑（d）
M一3一01I	18.8	12.3
B3一5一6	20.7	8.0
T1一4一01	9.1	6.5

請分析回答：

（1）根據實驗結果可以確定溶解磷能力最強的菌株是________________。

（2）為進一步測定初步篩選的三種菌株實際溶解磷的能力，研究人員將它們接種到基礎培養基B中，并在37°C、200r·min- 1搖床培養，定期取上清液，測定溶液中可溶性磷含量得到如圖所示曲線。結果表明最優良的解磷菌株是_____________。

（3）若要對解磷菌計數需要進行純化。在純化菌種時接種了6個平板，每個平板均接種了0.lmL樣品并培養。菌落數分別是210、230、470\190\29，則樣品中菌種的數量為______個/mL。和直接用顯微鏡計數的結果對比__________（填寫“偏大”或“偏小”），理由是_____________。

（4）對培養液進行滅菌時，高壓滅菌鍋的鍋蓋的排氣管應放在滅菌桶___________（填寫“內側”或“外側”）滅好菌后切斷高壓蒸汽滅菌鍋熱源，____________，打開放氣閥放氣，然后開啟鍋蓋取出培養液。

Answer 1

【答案】B3一5一6 M一3一01 2100 偏小 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上看到的只是一個菌落，統計的是活菌數；顯微鏡直接計數往往是死菌活菌都計數 內側 待壓力表歸零后

【解析】

根據題意和圖表分析，固體培養基中某有毒化合物在微生物的作用下溶解，會在菌落周圍形成透明圈，透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物分解的能力大小，即圖中該比值越大，說明微生物分解的能力越大，表格中B3一5一6的該比值最大，說明B3一5一6的分解能力最強。

（1）根據以上分析已知，溶解磷能力最強的菌株是B3一5一6。

（2）根據實驗曲線圖，不難看出M-3-01實際溶解磷能力最強。

（3）微生物計數應該選擇30-300 的菌落數，因此樣品中菌種的數量=（210+230+190）÷3÷0.1=2100個。當兩個或多個細胞連在一起時，平板上看到的只是一個菌落，統計的是活菌數；顯微鏡直接計數往往是死菌活菌都計數，所以計算出的值和直接用顯微鏡計數的結果對比偏小。

（4）對培養液進行滅菌時，高壓滅菌鍋的鍋蓋的排氣管應放在滅菌桶內側，滅好菌后切斷高壓蒸汽滅菌鍋熱源，待壓力表歸零后，打開放氣閥放氣，然后開啟鍋蓋取出培養液。