Question

【題目】研究人員用圖1中質粒和圖2中含目的基因的片段構建重組質粒（圖中標注了相關限制酶切割位點），將重組質粒導入大腸桿菌后進行篩選及PCR鑒定。以下敘述不正確的是

A. 構建重組質粒的過程應選用BclⅠ和HindⅢ兩種限制酶

B. 使用DNA連接酶將酶切后的質粒和目的基因片段進行重組

C. 含有重組質粒的大腸桿菌可以在添加氨芐青霉素的培養基上生存

D. 利用PCR鑒定含目的基因的大腸桿菌時應選用引物甲和引物丙

Answer 1

【答案】C

【解析】

分析題圖：質粒和外源DNA分子都含有三種限制酶切點，即限制酶BamHⅠ、BclⅠ和Hind III，其中BamHⅠ切割位點在質粒的兩個標記基因上均有，所以不能用該酶切割質粒。用BclⅠ和Hind III酶切質粒切成兩個片段，用BclⅠ和Hind III酶能將外源DNA切成三段，只有含目的基因的片段通過DNA連接酶與質粒（含標記基因）連接形成的重組質粒符合要求，而另一個重組質粒無標記基因，不符合要求。導入目的基因的大腸桿菌，其重組質粒是用BclⅠ和HindIII酶切割的，其中的氨芐青霉素抗性基因已被破壞，故不能抗氨芐青霉素。

用BclⅠ和HindIII酶切質粒切成兩個片段，一個含四環素抗性基因，另一個不含抗性基因；用BclⅠ和HindIII酶能將外源DNA切成三段，只有含目的基因的片段通過DNA連接酶與含四環素抗性基因質粒連接形成的重組質粒符合要求，而另一個重組質粒無抗性基因，不符合要求，A正確；將目的基因與質粒形成基因表達載體需要用DNA連接酶連接，B正確；由于構建重組質粒時，需用BclⅠ酶和HindⅢ酶切質粒，質粒上氨芐青霉素抗性基因被破壞，故含有重組質粒的大腸桿菌不能在添加氨芐青霉素的培養基上生存，C錯誤； PCR擴增目的基因時，需要引物引導子鏈合成，由圖中引物引導子鏈形成的方向可知，利用PCR鑒定含目的基因的大腸桿菌時應選用引物甲和引物丙，D正確。

故選C。