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【題目】線粒體是與細胞凋亡密切相關的細胞器。為研究蛋白B對家蠶細胞凋亡的影響,科研人員做了如下實驗。

(1)細胞色素c是線粒體內膜上的重要電子傳遞體,參與有氧呼吸第__________階段的生化反應。細胞受到凋亡信號的作用后,線粒體膜上的非特異性通道打開,引起線粒體膜的性發生改變,線粒體膜兩側離子的分布發生變化,導致線粒體膜電位下降或消失,使得細胞色素c釋放出來,引發細胞凋亡。

(2)用生物堿H處理懸浮培養的家蠶細胞,處理不同時間后,用凝膠電泳方法測定細胞溶膠(細胞質基質)中細胞色素c的含量,結果如下圖所示。

①由于細胞中微管蛋白的表達量__________,在實驗中可作為標準物質,以校準和消除由于細胞培養操作、細胞取樣量和細胞色素c的__________等無關變量對實驗結果的影響。

②據圖分析,正常細胞的細胞溶膠中__________檢測到細胞色素c,由__________判斷,隨著生物堿H處理時間延長,細胞色素c逐漸釋放到細胞溶膠中。

(3)為研究蛋白B的功能,科研人員構建蛋白B基因過量表達載體和蛋白B基因表達干擾載體,導入懸浮培養的家蠶細胞中,用__________處理轉基因家蠶細胞,檢測到過量表達蛋白B的細胞溶膠中細胞色素c的釋放量減少,抑制蛋白B基因表達的細胞溶膠中細胞色素c的釋放量顯著增加,推測蛋白B______________________________

【答案】 (離子)通透 相對穩定(且豐富) 檢測方法 沒有(或“未能”) 細胞溶膠中細胞色素c含量增加,分享的線粒體中細胞色素c含量下降 生物堿H 抑制細胞色素c的釋放,進而抑制細胞凋亡

【解析】試題分析:本題以為了研究蛋白B對家蠶細胞凋亡的影響,科研人員所作的實驗為題材,考查細胞結構和功能、基因工程操作步驟等知識,識記細胞結構和功能、明確基因工程的操作步驟,再結合題意作答。

(1)有氧呼吸第三階段的場所是線粒體內膜,由細胞色素c是線粒體內膜上的重要電子傳遞體,可推測細胞色素c參與有氧呼吸第三階段的生化反應;細胞受到凋亡信號的作用后,線粒體膜上的非特異性通道打開,會引起線粒體膜的(離子)通透性發生改變,線粒體膜兩側離子(和質子)的分布發生變化,導致線粒體膜電位下降或消失,使得細胞色素c 釋放出來,引發細胞凋亡
(2)①在用生物堿H處理懸浮培養的家蠶細胞,處理不同時間后,用凝膠電泳方法測定細胞溶膠(細胞質基質)中細胞色素c的含量的實驗中,由于細胞中微管蛋白的表達量相對穩定(且豐富),所以在實驗中可作為標準物質,以校準和消除由于細胞培養操作、細胞取樣量和細胞色素c的檢測方法等無關變量對實驗結果的影響
②分析題圖可知,正常細胞的細胞溶膠中沒有(或未能)檢測到細胞色素c,而據細胞溶膠中細胞色素c含量增加,分離的線粒體中細胞色素c含量下降可判斷,隨著生物堿H處理時間延長,細胞色素c逐漸釋放到細胞溶膠中
(3)為研究蛋白B的功能,科研人員構建蛋白B基因過量表達載體和蛋白B基因表達干擾載體,導人懸浮培養的家蠶細胞中,用生物堿H處理轉基因家蠶細胞,檢測到過量表達蛋白B的細胞溶膠中細胞色素c的釋放量減少,而抑制蛋白B基因表達的細胞溶膠中細胞色素c的釋放量會顯著增加,據此可推測蛋白B抑制細胞色素c的釋放,進而抑制細胞凋亡

練習冊系列答案
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(1)為確定HuC基因的轉錄起始位點,提取斑馬魚早期胚胎神經細胞的總RNA,以與__________互補的一段單鏈DNA序列做為引物,加入________酶,獲得cDNA。對該cDNA的序列進行測定,與HuC基因的序列進行比對,確定轉錄起始位點,定為+1號堿基,其上游的堿基定為負值。

(2)為了探究轉錄起始位點上游不同長度片段在基因轉錄中的作用,科研人員從__________(選填“基因組”或“cDNA”)文庫中獲取該轉錄起始位點上游的片段,用__________酶處理此片段和含GFP (綠色熒光蛋白)基因的載體,獲得重組DNA分子。

(3)用不同種類的限制酶重復步驟(2),獲得不同長度的重組DNA分子,通過顯微注射方法分別導入斑馬魚的__________細胞,通過熒光顯微鏡觀察早期胚胎神經細胞、肌肉細胞中的熒光強度,結果如圖所示。

注:“+”多少表示熒光強度,“-”表示未檢測到熒光。虛線表示直接連接在一起。

①獲得圖中所示的重組DNA分子,需要用到的限制酶有__________種。

②據圖分析,缺失HuC基因上游的__________片段就會造成HuC基因在所有細胞中表達被完全抑制。-1962bp至-432bp片段的存在會__________HuC基因在肌肉細胞中的表達,對神經細胞中的表達__________

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