Question

【題目】（三）回答下列有關微生物與基因工程有關的問題

【1】基因工程的第一步是獲取目的基因，獲取的方法包括__________和化學方法人工合成。如果要想獲取人的胰島素基因，只能用化學方法人工合成，具體的做法是從人體__________細胞中獲取胰島素mRNA，再通過__________過程即可獲得目的基因。

【2】基因工程的第二步是將目的基因和運載體重組，重組時需要選擇合適的限制酶和________酶。常用的運載體是細菌質粒（如圖示），

質粒中ori為質粒復制所必需的DNA序列，啟動子是使轉錄開始的一段DNA序列，終止子是提供轉錄終止信號的DNA序列。青霉素抗性基因作為__________基因，以便于篩選。質粒上還有多種限制酶的切點，若目的基因上也有上述質粒中相應限制酶的切點，為避免目的基因自身的環化并能與圖中質粒準確重組，可選用的限制酶是____

A. NdeI和XbaI B. NdeI和BamHI C. XbaI D. PstI E. BamHI

【3】基因工程的第三步是將重組質粒導入受體細胞，例如，轉基因動物常用的受體細胞為____________。

【4】基因工程的第四步是篩選出導入重組質粒的受體細胞。

（1）如用大腸桿菌作為受體細胞，則該大腸桿菌中不應含有青霉素抗性基因，請闡述其原因？_______________________________________________________。

（2）培養導入了重組質粒的大腸桿菌時，需配制培養基。該培養基除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還應加入的物質有____（多選）

A. 細胞分裂素 B. 瓊脂 C. 噬菌體 D. 青霉素

Answer 1

【答案】

【1】從某種生物體細胞中分離胰島B逆轉錄

【2】DNA連接標記B

【3】受精卵

【4】若含有則會干擾篩選BD先調節pH后滅菌高壓滅菌涂布法劃線法AC

【解析】本題考查基因工程、微生物的培養，考查對基因工程操作程序、培養基種類和配制方法的理解和識記。

【1】獲取目的基因的方法包括從某種生物體細胞中分離和化學方法人工合成。獲取人的胰島素基因，可以從人體胰島B細胞中獲取胰島素mRNA，再通過逆轉錄過程即可獲得目的基因。

【2】將目的基因和運載體重組時需要選擇合適的限制酶和DNA連接酶，以保留ori、啟動子、終止子，同時保留青霉素抗性基因作為標記基因，以便于篩選。為避免目的基因自身的環化并能與圖中質粒準確重組，應選用兩種不同的限制酶，可選用的限制酶是NdeI和BamHI，選擇NdeI和XbaI會導致終止子被切除。

【3】由于分化的動物體細胞難以表達全能性，轉基因動物常用的受體細胞為受精卵。

【4】（1）根據質粒上的青霉素抗性基因在大腸桿菌中是否表達判斷目的基因是否進入大腸桿菌，若大腸桿菌中含有青霉素抗性基因，則會干擾篩選。

（2）篩選含有重組質粒的大腸桿菌，應使用固體培養基，培養基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還需加入瓊脂和青霉素。

（3）培養基配制和滅菌時，滅菌與調節PH的先后順序是先調節PH后滅菌；一般對配置的培養液采用高壓法滅菌。

（4）據圖可知獲得圖A效果的接種方法涂布法，獲得圖B效果的接種方法是劃線法。

（5）嗜熱菌耐高溫的原因是細胞的DNA中堿基G和C含量較高，氫鍵較多，所以DNA較穩定。