Question

【題目】病毒介導基因轉移是現在基因治療研究的最新方向，美、法等國成功采用腺病毒載體進行心、腦、肺、肝內膽管和肌肉組織的體內基因轉移．其具體思路如圖所示：

回答下列問題：
（1）如果要在短時間內獲得較多的目的基因，通常采用技術，在操作步驟中包括兩次升溫和一次降溫，其中降溫的目的是 ．
（2）構建基因表達載體時需要用到的工具酶有 ．
（3）作為接受轉移基因的體細胞應具有的特點是（寫出一點即可）．在進行細胞培養時，當細胞貼滿瓶壁時需用酶處理，使之分散成單個細胞，培養液中還需通人無菌氣體，其中通入CO2的目的主要是 ．
（4）如果檢測發現目的基因被成功導入了受體細胞，但卻沒有檢測到目的基因相對應的蛋白質，應考慮位于目的基因首端的和末端的是否設計好，并從這方面進一步改善．

Answer 1

【答案】
（1）PCR；使引物和模板鏈結合
（2）限制酶和DNA連接酶
（3）具有增殖優勢（生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理）；胰蛋白；維持培養液的PH
（4）啟動子；終止子
【解析】解：（1）如果要在短時間內獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術，第一次升溫是使雙鏈解開，即高溫解鏈；降溫的目的是使引物和模板鏈結合，即低溫復性；第二次升溫是使DNA復制開始進行．（2）構建基因表達載體時需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶．（3）作為接受轉移基因的體細胞應具有的特點是 具有增殖優勢；生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理等．在進行細胞培養時，當細胞貼滿瓶壁時需用胰蛋白酶處理，使之分散成單個細胞，培養液中還需通人無菌氣體，其中通入CO2的目的主要是維持培養液的PH．（4）基因表達載體包括啟動子、終止子、目的基因和標記基因，啟動子位于目的基因的首端，啟動基因的轉錄，終止子位于目的基因的末端，終止轉錄過程．
所以答案是：（1）PCR 使引物和模板鏈結合（2）限制酶和DNA連接酶（3）具有增殖優勢（生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理） 胰蛋白 維持培養液的PH（4）啟動子 終止子
【考點精析】解答此題的關鍵在于理解基因工程的原理及技術的相關知識，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術．