Question

【題目】玉米A具有高產、抗病等優良性狀，為使其獲得抗除草劑性狀，操作流程如下圖，其中人為整合上去的報告基因可在篩選檢測目的基因是否導入起作用�；卮鹣铝杏嘘P問題。

（1）通過______________或______________法可以擴増抗除草劑基因G。

（2）Ti質粒上的報告基因在農桿菌內不能獲得相應的蛋白質產物，在受體植物細胞中則可以，可能的原因是__________________________________________。步驟①中為防止酶切產物自身環化，構建表達載體需用2種限制酶，選擇的原則______________________。

①質粒內，每種限制酶只有一個切割位點

②酶切后，Ti質粒形成的兩個黏性末端序列相同

③G基因編碼蛋白質的序列中，每種限制酶只有一個切割位點

④酶切后，G基因形成的兩個黏性末端序列不相同

A．①③ B．①④ C．②③ D．②④

（3）農桿菌感染愈傷組織時，T－DNA攜帶的G基因易轉移到受體細胞______________上，然后除盡農桿菌，再使用含_____________________的培養基得到植株B。整個過程中影響玉米愈傷組織能否成功再生植株的原因除了環境因素和培養基的成分之外，還可能有_______________________________________________________（答出兩點即可）。

（4）植物根瘤磨碎后，為使農桿菌的分離效果更好，采用______________法。若某一實驗組平板上茵落平均數為38個／平板，而空白對照組的一個平板上出現了8個菌落，這種結果說明在此次分離出現了______________現象。若將30（即38－8）個／平板作為本組菌落數的平均值，該該做法_______（填“正確”或“不正確”）。

（5）上圖操作流程的玉米幼胚到植株B的過程中，不同培養基的區別主要在于植物生長調節劑的濃度不同，過程④⑤分別選擇______________、______________（填下表中的培養基類型甲或乙），寫出表中“……＂處的信息____________________________。

Answer 1

【答案】PCR擴增農桿菌體內擴增報告基因轉錄后在農桿菌內無法加工，從而無法合成相應蛋白質B染色體除草劑玉米的基因型，愈傷組織繼代培養的次數涂布雜菌污染不正確乙甲MS培養基、蔗糖、瓊脂、水

【解析】

每種限制酶都有特定的切割位點，構建基因表達載體時可用同一種限制酶切割目的基因和運載體，用DNA連接酶鏈接，實際操作中通常可用兩種限制酶切割目的基因兩端，防止酶切產物自身環化；農桿菌易感染雙子葉植物和裸子植物，對單子葉植物沒有感染力，Ti質粒的T-DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體上，轉化時，目的基因插入Ti質粒的T-DNA上。影響愈傷組織能否成功再生植株的原因有：環境因素如光溫、培養基成分如植物激素配比，以及不同種類植物或同種植物的不同基因型個體間存在遺傳的差異，細胞全能性的表達程度大小不同，有些在多次繼代培養后會喪失細胞全能性的表達能力。分離微生物時，涂布分離更易獲得單菌落；植物組織培養過程中培養基為MS培養基，除了加入相關的植物生長調節劑，還需加入蔗糖、瓊脂、水等；NAA是萘乙酸，BA是芐基腺嘌呤，植物組織培養中用到的培養基組成如MS發芽培養基：MS培養基+BA溶液（多）+NAA溶液（少）+蔗糖+瓊脂；MS生根培養基：MS培養基+NAA溶液+蔗糖+瓊脂，因此甲是生根培養基，乙是發芽培養基，根據圖示，④需要用發芽培養基，⑤為生根培養基。

（1）擴增抗除草劑基因可通過PCR擴增或農桿菌體內擴增實現。

（2）農桿菌是原核生物，受體植物細胞是真核生物，原核生物細胞缺乏真核生物的蛋白質加工系統,因此報告基因轉錄后在農桿菌內無法加工，從而無法合成相應蛋白質。步驟①中選擇2種限制酶，目的是產生不同的黏性末端，防止酶切產物自身環化，因此①④符合，應選B。

（3）T－DNA攜帶的G基因易轉移到受體細胞染色體上；植株B具有抗除草劑性狀，因此需要在培養基中加入除草劑進行篩選；影響愈傷組織能否成功再生植株的原因除了環境因素和培養基的成分之外，還與玉米的基因型、愈傷組織繼代培養的次數有關。

（4）采用涂布分離法分離農桿菌效果更好；若空白對照組的一個平板上出現了8個菌落，說明在此次分離出現了雜菌污染，因此將30（即38－8）個／平板作為本組菌落數的平均值的做法不正確。

（5）④應選發芽培養基，⑤為生根培養基，而甲是生根培養基，乙是發芽培養基，因此④⑤分別選擇乙、甲；植物組織培養過程中除了加入相關的植物生長調節劑，還需加入MS培養基，蔗糖、瓊脂、水等。