Question

【題目】下列有關利用圖甲和圖乙信息來制備基因表達載體的說法正確的是（ ）

A.如圖甲將目的基因“切出”，可選擇Pst I，不能選擇Sma I

B.結合圖甲和圖乙可知在制備基因表達載體時可選擇用PstI和EcoRI兩種限制酶切割目的基因和質粒

C.如果質粒上所選限制酶的酶切位點不止一個，則切割后的質粒可能會丟失某些片段

D.若質粒上標出T-DNA片段，則所選限制酶切點應位于T-DNA片段中

Answer 1

【答案】ACD

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因：DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA：分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質：抗原―抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

A、如圖甲將目的基因“切出”，可選擇PstⅠ，不能選擇SmaⅠ，因為用限制酶SmaⅠ切割會破壞目的基因，A正確；
B、使用限制酶PstⅠ切割質粒時會破壞標記基因（抗生素抗性基因），使用限制酶EcoRⅠ切割質粒時會破壞終止子，B錯誤；
C、如果質粒上所選限制酶的酶切位點不止一個，則切割后的質粒可能會丟失某些片段，C正確；
D、農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上。因此若質粒上標出T-DNA片段，則所選限制酶切點應位于T-DNA片段中，D正確。
故選ACD。