Question

【題目】不同品牌的酸奶具有不同的口味。某研究小組利用含碳酸鈣的固體培養基探究甲，乙兩品牌酸奶中乳酸菌的類型是否相同(乳酸能夠溶解碳酸鈣，使培養基變得透明)。請回答下列問題:

（1）將甲、乙兩品牌酸奶中的乳酸菌純化，分別接種在含碳酸鈣的固體培養基中培養，根據菌落周圍透明圈的大小，可確定酸奶中乳酸菌的類型。不同乳酸菌菌落透明圈大小不同的原因是_________________________________________________________

（2）家庭制作酸奶時，在純牛奶中加入少量酸奶相當于微生物培養技術中的________操作。 純牛奶變成酸奶，改變了口味但含有的能量減少，原因是____________________________。

（3）為長期保存純化的優質乳酸菌，可將菌液與________充分混勻，置于20C的冷凍箱中保存。

（4）該研究小組進一步探究甲 品牌酸奶中乳酸菌數量，實驗操作如下圖。接種微生物的方法有很多，圖中過程①②③所示的方法為_____________用該方法統計樣本菌落數后，所得數據需要乘以10后，才可表示乳酸菌的數量(單位:個/ml), 這里的n=______用該方法統計樣本菌落數時，同時需要做A、B、C三個平板，目的是________________________如果平板菌落數超過300，一般還需進一步_____

Answer 1

【答案】（在相同時間內）不同類型的乳酸菌產生乳酸的量不同，不同量的乳酸能夠溶解碳酸鈣量不同，形成的透明圈大小不同 接種 乳酸菌在發酵時使牛奶中的營養成分發生改變，乳酸菌細胞呼吸消耗部分有機物，從而使能量減少 滅菌的甘油 稀釋涂布平板法 6 設置重復組，取平均值，使實驗結果更加準確可靠 稀釋

【解析】

本題以乳酸菌為背景，綜合考查了微生物的分離和計數的相關知識。

（1）由于乳酸菌分泌的乳酸能夠溶解碳酸鈣，使培養基變得透明，不同類型的乳酸菌分泌乳酸的量不同，分泌量多的產生的透明圈較大，而分泌量少的產生的透明圈則較小。因此可以根據菌落周圍透明圈的大小，確定酸奶中乳酸菌的類型。

（2）由于酸奶中含有乳酸菌，因此在純牛奶中加入少量酸奶相當于微生物培養技術中的接種操作。純牛奶變成酸奶是由于乳酸菌發酵的結果，乳酸菌在發酵過程中利用牛奶中的營養物質進行代謝，通過細胞呼吸消耗了牛奶中的部分有機物，因此酸奶比純牛奶中的能量減少了，在乳酸菌代謝過程中又有新物質的生成，從而使牛奶中的口味發生了改變。

（3）微生物菌種的保藏有臨時保藏和長期保藏之分，臨時保藏是把菌種接種到試管的固體培養基上，在合適的溫度下培養，當菌落長成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養的菌液轉移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。

（4）要對微生物計數可以采用活菌計數法或顯微鏡直接計數法，題目所給的圖片信息是采用的活菌計數法，具體操作是通過稀釋涂布平板法完成的。由①②的操作可知這時已對酸奶樣品稀釋了100倍，②重復3次又稀釋了1000倍，從中取出0.1ml樣進行涂布，所用到的量是原來的10－6。因此這里的n=6。用稀釋涂布平板法計數時，要至少涂布3個平板，目的是設置重復組，取平均值，使實驗結果更加準確可靠。為了保證結果準確，一般選擇菌落數中30~300的平板進行計數，如果平板菌落數超過300，說明稀釋倍數不夠，一般還需進一步稀釋。