Question

CTAB法是一種從高等真核生物細胞中制備基因組DNA(總DNA)的技術。CTAB能跟核酸形成復合物，在高鹽溶液(>0.7 mol/L的NaCl溶液)中可溶并且穩定存在，當降低溶液中鹽的濃度(<0.3 mol/L的NaCl溶液)時，CTAB－核酸的復合物就會因溶解度降低而沉淀，再用70%酒精浸泡可洗脫掉CTAB；氯仿能使蛋白質發生變性而沉淀。提取和檢測水稻基因組DNA的操作步驟如下：

①在50 mL離心管中加入20 mL的CTAB抽提緩沖液(主要成分是1.4 mol/L的NaCl、2%的CTAB)，于65℃水浴中預熱；

②將20 g新鮮的水稻幼嫩葉片剪成小段后放于研缽中，用液氮速凍并研磨成粉末，加入上述離心管中，于65℃水浴中保溫30 min；

③取出離心管，冷卻至室溫，加入20 mL的氯仿，輕輕混勻20 min；

④在室溫下以12000 r/min的轉速離心10～20 min；

⑤將上清液移入另一個離心管中，加入2/3體積的經冷卻的異丙醇，用玻璃棒輕輕攪動，小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB－核酸的復合物沉淀；

⑥將沉淀移入另一個離心管中，加入70%乙醇洗滌，重復洗滌1～2次；

⑦吹干乙醇后，將DNA溶于適量的TE緩沖液中，在0.8%的瓊脂糖凝膠上電泳分離并在核酸紫外檢測儀上觀察。

請回答下列問題：

(1)植物基因組DNA(總DNA)的提取通常采用機械研磨的方法，常溫下研磨時，植物細胞勻漿中含有的多種酶會對DNA的提取產生不利影響。用液氮速凍，材料在研磨時易破碎，同時還具有_______________________________。

(2)實驗步驟③、④的目的是________________________________。

(3)實驗步驟⑤中，玻璃棒上出現沉淀的主要原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)對DNA進行定性檢測常用的試劑是________，瓊脂糖凝膠電泳是利用待分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及________、________，使帶電分子產生________而實現分離。DNA在260 nm的紫外線波段有一強烈的吸收峰，利用核酸紫外檢測儀可以進行________。

 

Answer 1

(1)降低細胞勻漿中酶的活性，避免對DNA的提取產生不利的影響

(2)去除溶液中的蛋白質(使蛋白質變性和沉淀)

(3)NaCl溶液的濃度<0.3 mol/L，CTAB－核酸的復合物因溶解度降低而沉淀

(4)二苯胺　分子大小　形狀的不同　不同的遷移速度　DNA含量的測定(或檢測DNA)