Question

（9分）CTAB法是一種從高等真核生物細胞中制備基因組DNA（總DNA）的技術。CTAB能跟核酸形成復合物，在高鹽溶液(＞0.7mol/L的NaCl溶液)中可溶并且穩定存在，當降低溶液中鹽的濃度(＜0.3mol/L的 NaCl溶液)，CTAB - 核酸的復合物就會因溶解度降低而沉淀，再用70% 酒精浸泡可洗脫掉CTAB；氯仿能使蛋白質發生變性而沉淀。提取和檢測水稻基因組DNA的操作步驟如下：

①在50ml離心管中加入20mlCTAB抽提緩沖液（主要成分是1.4mol/L 的NaCl、2%的CTAB），于65℃水浴中預熱；

②將20 g新鮮的水稻幼嫩葉片剪成小段后放于研缽中，用液氮速凍并研磨成粉末，加入上述離心管中，于65℃水浴中保溫30min；

③取出離心管中，冷卻至室溫，加入20mL的氯仿，輕輕混勻20min；

④在室溫下以 12000r/min的轉速離心10-20 min；

⑤將上清液移入另一個離心管中，加入2/3體積的經冷卻的異丙醇，用玻璃棒輕輕攪動，小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB - 核酸的復合物沉淀； 

⑥將沉淀移入另一個離心管中，加入70%乙醇洗滌，重復洗滌1-2次；

⑦吹干乙醇后，將DNA溶于適量的TE緩沖液中，在0.8%的瓊脂糖凝膠上電泳分離并在

核酸紫外檢測儀上觀察。

請回答下列問題：

（1）植物基因組DNA（總DNA）的提取通常采用機械研磨的方法，常溫下研磨時，

植物細胞勻漿含有多種酶類對DNA的提取產生不利的影響。用液氮速凍，材料在研磨時易于破碎，同時還具有        的作用。

（2）實驗步驟③ 、④的目的是        。

（3）實驗步驟⑤中，玻璃棒上出現沉淀的主要原因是       。

（4）對DNA進行定性檢測常用的試劑是           。瓊脂糖凝膠電泳是利用待分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及            、     ，使帶電分子產生         

而實現分離。DNA在260nm的紫外線波段有一強烈的吸收峰，利用核酸紫外檢測儀可以進行     。

 

Answer 1

【答案】

（1）降低細胞勻漿中酶的活性，避免對DNA的提取產生不利影響（2分）（2）去除溶液中的蛋白質（使蛋白質變性和沉淀）（3）溶液中NaCl的濃度＜0.3mol/L，CTAB - 核酸的復合物因溶解度降低而沉淀（4）二苯胺     分子大小     形狀的不同     不同的遷移速度    DNA含量的測定（或檢測DNA）

【解析】