Question

【題目】炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病，炭疽桿菌的檢測有多種方法。請回答下列問題：

（1）為從炭疽病疑似患者體內分離出炭疽桿菌，將采集到的患者皮膚膿包滲出物稀釋后取____mL滴于培養基表面，用______涂勻，這種接種方法稱為稀釋涂布平板法。

（2）在干凈的載玻片上滴上一滴蒸餾水，用____挑取菌種進行無菌操作，置于載玻片的水滴中，與水混合做成懸液并涂成直徑約1cm的薄層，為避免因____________，不利于觀察個體形態，可在載玻片上原菌液旁的一側再加一滴水，從已涂布的菌液中再取一環于此水滴中進行____，涂布成薄層。再經過沙黃莢膜染色鏡檢，觀察形態及莢膜特征，可以初步診斷。

（3）下圖是通過噬菌體裂解實驗進行確診的過程圖，請據圖回答：

①液體培養基35℃、24 h培養的目的是_________________________。

②圖中對照組需要加入______________________。

③若實驗結果是___________，則可以確診被檢者被炭疽桿菌感染。

Answer 1

【答案】0．1 無菌（或已滅菌）涂布器 接種環 細菌過多聚集成團（或細菌過多堆積在一起） 稀釋 菌種（微生物）擴大培養 等量的生理鹽水 對照組混濁，實驗組澄清

【解析】

1、培養基的基本成分：水、無機鹽、碳源、氮源及特殊生長因子；

2、無菌操作，包括滅菌和消毒兩種方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；滅菌的方法有干熱滅菌、灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌；

3、微生物的接種：微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，常用來統計樣品活菌數目的方法是稀釋涂布平板法。

4、微生物實驗室分離中配制培養基的操作步驟：計算→稱量→溶解→調pH→滅菌步驟。

5、培養基的分類有按物理性質分有固體、半固體、液體培養基；按用途分為選擇培養基和鑒別培養基。

（1）將采集到的患者皮膚膿胞滲出物稀釋后取0.1mL滴于培養基表面，用無菌涂布器涂勻，最終分離得到單菌落，這種接種方法稱為稀釋涂布平板法。

（2）常用的接種工具是接種環，用接種環挑取菌種置于玻片的水滴中制成菌懸液，為了避免細菌過多聚集成團，可將菌懸液進行稀釋，具體做法為在載玻片上原菌液旁的一側再加一滴水，從已涂布的菌液中再取一環于此水滴中進行稀釋，涂布成薄層，顯微鏡下觀察。

（3）接種可疑菌后，35℃培養24小時，目的是將菌種（微生物）擴大培養，細菌大量繁殖，液體培養基變渾濁。對照組試管中應加入等量生理鹽水，與實驗組同時培養6小時后，若實驗組液體培養基的渾濁度比對照組低（或對照組混濁，實驗組澄清），則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。此實驗依據的原理是實驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細菌死亡，溶液變澄清。