Question

【題目】圖1是目的基因，圖2為應用于基因工程中改造后的質粒PZyj，其長度為4 692 bp（bp即堿基對），其中wzh基因能合成某種化合物，其表達產物能使細菌白色菌落和培養基中化合物A反應呈紅色，tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；而MspI、EcoR I、BamH I為限制酶，括號中數字表示該酶位于質粒的位置，其中BamH I識別的堿基序列和酶切位點（箭頭表示）為。啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，驅動基因轉錄出mRNA。請回答下列問題：

（1）用EcoR I酶對質粒切割后DNA的片段長度為______bp，EcoR I酶的作用特___________________。

（2）用MspI酶處理質粒PZyj后，酶切位點之間最短的DNA片段的長度為 ___________bp，將上述含Msp I酶DNA片段的溶液用高溫處理后，再加DNA連接酶作用半小時，若僅考慮兩兩相連，則有___________種連接產物。

（3）將質粒PZyj和目的基因用限制酶處理后進行連接，形成重組質粒。該過程應選用___________酶，保證質粒與目的基因具有相同的黏性末端；該質粒中tsr基因和wzh基因的作用是_________。

（4）為了篩選出成功導入含目的基因的重組質粒的細菌，應將細菌接種于含___________（填物質名稱）培養基上培養。

Answer 1

【答案】

（1）4 692（2分） 識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并使特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂（3分）

（2）586（2分） 6（2分）

（3）BamH I（2分） 作為標記基因，便于篩選含目的基因的受體細胞（2分）

（4）化合物A和硫鏈絲菌素（2分）

【解析】

（1）PZyj質粒上EcoR I酶的酶切位點只有一個，經過切割，質粒由環狀變為鏈狀，質粒上堿基數量不變。（2）PZyj質粒上Msp I酶的酶切位點有三個，從圖上標注的堿基數目的位置可以看出，在1 270到1 857之間的片段最短，堿基對是從1 270開始到1 857終止，共有586個堿基對；由于切割形成三個不等長片段的黏性末端都是一樣的，所以用DNA連接酶使其相互連接的種類有：同種DNA片段相連和異種DNA片段連接，共有6種。

（3）構建重組質粒首先要考慮目的基因和質粒是否有共同的限制酶切割位點，從圖中可看出BamH I是目的基因和PZyj質粒共有的酶；題干中已經說明tsr基因和wzh基因是作為標記基因，其目的是便于篩選含目的基因的受體細胞。

（4）使用含有化合物A和硫鏈絲菌素的選擇培養基，含tsr基因和wzh基因的菌在培養基上呈紅色，否則是白色。