Question

【題目】某同學欲從土壤中篩選能夠分解纖維素的細菌，請回答以下問題：

（1）在篩選具有分解纖維素能力的細菌時，應將土壤樣品用____________________進行稀釋，然后接種到以____________為唯一碳源的培養基上。

（2）采用____________法對初步篩選到的菌株進行純化。

（3）對純化的菌種再采用____________方法進行鑒定。

（4）若將稀釋105倍的上述纖維素分解菌菌液，用直接計數法和稀鐸涂布平板法進行計數。

①直接計數法：用吸管吸取0.1ml該菌液，滴于血球計數板上的蓋玻片邊緣，待該細菌全部沉降到計數室底部，用顯微鏡直接計數，并計算出每升菌液的細菌數目。

②稀釋涂布平板法計數：在五個固體培養基上分別接種O.lmL該細菌菌液，適宜條件下培養一段時間后，培養基上的菌落數分別為：40、152、154、156，則每升菌液中細菌數量為_________個。

③正常操作情況下，上述兩種計數法中，_________統計獲得的細菌數量數目目偏多，原因是_________。

Answer 1

【答案】 無菌水 纖維素 稀釋涂布平板法或平板劃線法 剛果紅染色法 1.26×1011 直接計數法 直接計數法無論菌休死活均被計數，而稀釋涂布平板法當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落

【解析】本題考查微生物的選擇培養、微生物計數等知識，要求考生掌握無菌操作技術，掌握篩選纖維素分解菌的方法，能利用直接計數法和稀釋涂布平板法計數微生物，并比較兩種計數法的差異。

（1）在篩選具有分解纖維素能力的細菌時，應將土壤樣品用無菌水進行稀釋，以防止混入其他雜菌，然后接種到以纖維素為唯一碳源的培養基上。

（2）采用稀釋涂布平板法或平板劃線法都可以對初步篩選到的菌株進行純化。

（3）對純化的菌種再采用剛果紅染色法方法進行鑒定，若培養基中出現透明圈，則說明透明圈中存在具有分解纖維素能力的細菌。

（4）若將稀釋105倍的上述纖維素分解菌菌液，用直接計數法和稀鐸涂布平板法進行計數。①直接計數法：用吸管吸取0.1ml該菌液，滴于血球計數板上的蓋玻片邊緣，待該細菌全部沉降到計數室底部，用顯微鏡直接計數，并計算出每升菌液的細菌數目。②稀釋涂布平板法計數：在五個固體培養基上分別接種O.lmL該細菌菌液，適宜條件下培養一段時間后，培養基上的菌落數分別為：40、152、154、156，故每升菌液中細菌數量為（40+152+154+156）40.1x1000x105=1.26x1011個。③正常操作情況下，上述兩種計數法中，直接計數法統計獲得的細菌數量數目目偏多，原因是直接計數法無論菌體死活均被計數，而稀釋涂布平板法當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。