Question

【題目】人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫用價值，只能從人血漿中制備。圖一是以基因工程技術獲取重組HSA的兩條途徑，其中報告基因表達的產物能催化無色物質K呈現藍色。圖二為相關限制酶的識別序列和切割位點，以及HAS基因兩側的核苷酸序列。據圖回答下列問題：

（1）依據圖一和圖二分析，在構建基因表達載體時下列敘述錯誤的是___________。

A．應該使用酶B和酶C獲取HSA基因

B．應該使用酶A和酶B切割Ti質粒

C．成功建構的重組質粒含1個酶A的識別位點

D．成功建構的重組質粒用酶C處理將得到2個DNA片段

（2）PCR技術應用的原理是____________，在利用該技術獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用____________尋找HSA基因的位置并進行擴增。

（3）圖一過程①中需將植物細胞與農桿菌混合后共同培養，旨在讓___________整合到植物細胞染色體DNA上；除盡農桿菌后，還須轉接到含____________的培養基上篩選出轉化的植物細胞。

（4）圖一③過程中將目的基因導入綿羊受體細胞，采用最多，也是最為有效的方法_________。

（5）為檢測HSA基因的表達情況，可提取受體細胞的_________________，用抗血清白蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】C DNA（雙鏈）復制 引物 T-DNA 無色物質K 顯微注射技術 蛋白質

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）A、由圖中DNA序列和酶切位點序列可知應使用酶B和酶C切割獲取HSA基因，A正確；

B、導入的目的基因時應在T-DNA上，因此Ti質粒應用酶A和酶B切割，因為酶A和酶B切出的黏性未不能互補配對，可以將目的基因連接進去，B正確；

C、據圖一圖二分析可知，成功建構的重組質粒上不再有酶A的識別位點，C錯誤；

D、成功構建的重組質粒用酶C處理能得到2個DNA片段，應是A-C，和C-A片段，D正確。

故選C。

（2）PCR技術應用的原理是DNA（雙鏈）復制，在利用該技術獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用引物尋找HSA基因的位置并進行擴增。

（3）圖一過程①中需將植物細胞與農桿菌混合后共同培養，利用農桿菌的侵染特性，讓T-DNA整合到植物細胞染色體DNA上；除盡農桿菌后，為了篩選出轉化的植物細胞，利用重組質粒上的報告基因表達的產物能催化無色物質K呈現藍色的特性，進行篩選，故還須將植物細胞轉接到含無色物質K的培養基上。

（4）圖一③過程中將目的基因導入綿羊受體細胞，通常采用較多的方法是顯微注射技術。

（5）為檢測HSA基因的表達情況，可利用抗原抗體雜交技術，具體做法是：提取受體細胞的蛋白質，用抗血清白蛋白的抗體做雜交實驗。