Question

【題目】我國肝損傷病的發生率較高。據研究，不同濃度的胰島素對減緩肝細胞損傷有保護作用，且胰島素濃度越高保護作用越強。LPS是一種導致肝損傷的常見物質（用生理鹽水配制）。現欲以大鼠為材料驗證上述結論，回答下列問題：

（1）材料制備：

①肝細胞懸液的制備：取某健康幼年大鼠的肝臟，適宜條件下取出剪碎再用______________酶消化，經多次洗滌離心處理得到分散的肝細胞，加入適宜的細胞培養液置于卡氏瓶和CO2培養箱中進行______________培養，將培養得到的肝細胞懸液隨機分為5組，編號為A—E，每組均需再____________________________，置于相同且適宜的培養瓶中培養備用。

②胰島素溶液：用生理鹽水配制低、中、高三種濃度的胰島素溶液，分別加入到C、D、E組的肝細胞懸液中。

（2）實驗方案及結果預期：

①A組作為空白對照組，則往B、C、D、E組還需加入等量的______________。

②若本實驗的結果用細胞存活率作為檢測指標，各組的存活細胞數先用_________測出OD值，然后計算各組的細胞存活率。細胞存活率＝該組OD值／A組OD值×100％，不考慮細胞死亡對OD值的影響。

③用柱形圖表示各組的實驗結果_____。

（3）實驗從細胞水平分析推測胰島素對減緩肝細胞損傷的機理可能有______________（至少寫出二點）。

Answer 1

【答案】胰蛋白 原代 設多個重復樣液 LPS 比色計（或比濁計、分光光度計） 促進細胞分裂 延緩細胞凋亡

【解析】

分析題文描述可知：該實驗的目的是驗證不同濃度的胰島素對減緩肝細胞損傷有保護作用，且胰島素濃度越高保護作用越強，自變量為不同濃度的胰島素，因變量是肝細胞的損傷程度，可以用細胞的存活率來表示。為了使實驗更具有科學性，需要設置空白對照組和不加胰島素且經LPS作用后的對照組。據此結合實驗設計要遵循的對照原則、等量性原則、重復原則等分析解答相關問題。

(1)材料制備：依據實驗目的、實驗設計的原則，首先應借助動物細胞的培養過程制備肝細胞懸液并分組編號，其操作過程為：取某健康幼年大鼠的肝臟，適宜條件下取出剪碎再用胰蛋白酶消化，經多次洗滌離心處理得到分散的肝細胞，加入適宜的細胞培養液置于卡氏瓶和CO2培養箱中進行原代培養，將培養得到的肝細胞懸液隨機分為5組，編號為A—E，每組均需再設置多個重復樣液，置于相同且適宜的培養瓶中培養備用。

(2 )實驗方案及結果預期：

①依據題文描述可知，若A組作為空白對照組，則A組應為正常的肝細胞，而B、C、D、E組應為受到損傷的肝細胞，所以需要往B、C、 D、E組加入等量的LPS。

②若本實驗的結果用細胞存活率作為檢測指標，依據計算公式“細胞存活率＝該組OD值／A組OD值×100％”可知：需要先用比色計測出各組的OD值。

③因該實驗是驗證性實驗，其結論是已知的，即不同濃度的胰島素對減緩肝細胞損傷有保護作用，且胰島素濃度越高保護作用越強，所以實驗結果檢測的各組細胞存活率由大到小依次是A組＞E組＞D組＞C組＞B組。反映各組實驗結果的柱形圖見答案。

(3)從細胞水平分析推測：胰島素可能通過延緩細胞分裂、延緩細胞凋亡等來減緩肝細胞損傷。