Question

【題目】我國科學家目前正在探索培育過量表達蔗糖轉運蛋白基因（TaSUT1A）的轉基因小麥，通過分析TaSUT1A在轉基因小麥中的遺傳及其在抗干旱環境中的作用，選育抗旱的轉基因小麥新品種。小麥屬于單子葉植物，下圖為基本技術流程示意圖。請回答下列問題：

（1）為了大量擴增分離得到的TaSUT1A，一般采用的技術是______________，該技術擴增目的基因的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是______________________________。

（2）一般采用相同的_______切割目的基因片段與載體，原因是_________________。

（3）將構建好的基因表達載體導入小麥細胞常用____________法，但成本較高；受體細胞經脫分化形成愈傷組織，脫分化是讓已經分化的細胞經誘導后失去其______________________的過程。

（4）為了證明TaSUT1A是否表達，可以通過______________檢測有無蔗糖轉運蛋白生成，并通過與________________中蔗糖轉運蛋白含量的對比來確定TaSUT1A是否過量表達。

Answer 1

【答案】PCR技術 根據這一序列合成引物 限制性核酸內切酶（或限制酶） 獲得相同的黏性末端 基因槍 特有的結構和功能而轉變成未分化細胞 抗原-抗體雜交 普通正常小麥

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）為了大量擴增分離得到的TaSUT1A，一般采用的是PCR技術，該技術擴增目的基因的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是根據這一序列合成引物。

（2）一般采用相同的限制酶切割目的基因片段與載體，這樣可獲得相同的黏性末端，便于DNA連接酶連接。

（3）將構建好的基因表達載體導入小麥細胞常用基因槍法。愈傷組織在結構形態上的特點是呈無固定形態的薄壁細胞。脫分化是讓已經分化的細胞經誘導后失去其特有的結構和功能而轉變成未分化細胞的過程。

（4）為了證明TaSUT1A是否表達，可以通過抗原-抗體雜交檢測有無蔗糖轉運蛋白生成，并通過與普通正常小麥中蔗糖轉運蛋白含量的對比來確定TaSUT1A是否過量表達。