Question

【題目】圖甲、乙中的箭頭表示三種限制性核酸內切酶的酶切位點，ampr表示氨芐青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列錯誤的是（ ）

A.在構建重組質粒時，可用PstⅠ和HindⅢ切割質粒和外源DNA

B.在酶切過程中，不能破壞質粒中全部的標記基因

C.圖甲中的質粒用BamHⅠ切割后，含有2個游離的磷酸基團

D.導入表達載體的大腸桿菌可以在含氨芐青霉素的培養基中生長

Answer 1

【答案】D

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

A、在構建重組質粒時，需要選擇相同的限制酶切割外源基因和質粒，分析圖甲和圖乙，質粒和外源基因中相同的限制酶是PstⅠ和HindⅢ，且兩種限制酶不會破壞目的基因，并且質粒上能夠保留一個完整的標記基因，A正確；
B、在酶切過程中，不能破壞質粒中全部的標記基因，能保留其中的一個，B正確；
C、圖甲中的質粒用BamHⅠ（一個切割點）切割后，環狀DNA變為鏈狀DNA，故其中含有2個游離的磷酸基團，C正確；
D、用PstⅠ切割后，氨芐青霉素抗性基因被破壞了，導入表達載體大腸桿菌不可以在含氨芐青霉素的培養基中生長，D錯誤。
故選D。