Question

【題目】回答與分離以尿素為氮源的微生物有關的問題：

（1）有些細菌含有_________，它們可以通過降解尿素作為其生長的氮源。請用化學反應式表示這類細菌降解尿素的過程____________________。

（2）本實驗需通過比較尿素固體培養基和 LB 固體培養基菌上的落數，了解土壤稀釋液中能以尿素為氮源的微生物的比例，因此要用____________（填方法）進行接種。配置培養基時選擇瓊脂糖作為凝固劑的原因是___________。尿素溶液的滅菌選擇的方法是______。

（3）已知氨與納氏試劑反應生成淡紅色絡合物。為了定量測定所分離的微生物對尿素的降解能力，可選用液體培養基培養，并利用光電比色法測定培養液 NH3 的含量。步驟如下：第一步，預實驗。將培養液過濾和脫色處理后，用納氏試劑顯色處理。用光程為 1cm 的比色杯在 570nm 處測定光密度值。若光密度值偏低，應選擇____（ A．增大光程，光波長不變B．增大光程，光波長增加 C．減小光程，光波長不變 D．減小光程，光波長增加）處再次測定光密度值， 直到數據適宜為止。第二步，標準曲線的制作。用蒸餾水配制______，與納氏試劑反應后，用比色計測定，并制作____________的標準曲線。第三步，樣品處理。將培養液過濾后，進行脫色處理，用納氏試劑顯色處理。

第四步，樣品測定與計算。

Answer 1

【答案】脲酶 涂布分離法 瓊脂糖中不含N元素 G6玻璃砂漏斗過濾 A 一系列濃度的氨標準溶液 氨濃度與光密度值

【解析】

1、土壤中分解尿素的細菌的分離的原理：培養基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發育繁殖，而受到抑制，所以用此培養基就能夠選擇出分解尿素的微生物。
2、微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

（1）能夠降解尿素的細菌含有脲酶，其降解尿素的方程式為：。

（2）根據題意分析，本實驗要觀察培養基上的菌落數，因此應該用涂布分離法進行接種；配置培養基時選擇瓊脂糖作為凝固劑的原因是瓊脂糖中不含N元素；尿素溶液的滅菌選擇的方法是G6玻璃砂漏斗過濾。

（3）根據題意分析，第一步預實驗中，將培養液過濾和脫色處理后，用納氏試劑顯色處理。用光程為1cm的比色杯在570nm處測定光密度值。若光密度值偏低，應選擇增大光程，光波長不變，處再次測定光密度值，直到數據適宜為止。第二步，標準曲線的制作時，用蒸餾水配制一系列濃度的氨標準溶液，與納氏試劑反應后，用比色計測定，并制作氨濃度與光密度值的標準曲線。