Question

【題目】如圖為單克隆抗體制備流程示意圖．
（1）單克隆抗體制備技術的基礎是 ．
（2）細胞融合是隨機的過程，在HAT培養基中培養，目的是 ． 在細胞培養過程中，培養液中需要添加無機鹽，但要注意無機鹽的 ， 以保證生命活動的正常進行．
（3）為選育出能產生高特異性抗體的細胞，要將從HAT培養基上篩選出的細胞稀釋到7～10個細胞/mL，每孔滴入0.1mL細胞稀釋液，其目的是 ．
（4）與一般的血清抗體相比，單克隆抗體的優點是 ．
（5）若用15N標記的氨基酸培養能產生單克隆抗體的細胞，放射性物質在細胞結構中出現的先后順序是 ．

Answer 1

【答案】
（1）動物細胞培養、動物細胞融合
（2）篩選雜交瘤細胞；種類和數量（濃度）
（3）使每個孔內不多于一個細胞，達到單克隆培養的目的（或單一細胞培養以保證抗體的純度）
（4）靈敏度高、特異性強
（5）核糖體、內質網、高爾基體、細胞膜
【解析】解：（1）單克隆抗體的制備涉及的技術有動物細胞融合和動物細胞培養．（2）由圖可知，骨髓瘤細胞在HAT培養基上無法生長，所以骨髓瘤細胞自身融合的細胞也不能在該培養基上存活；淋巴細胞和淋巴細胞自身融合的細胞能在HAT培養基上正常生活，但不能增殖．所以，在HAT培養基中培養，目的是篩選出雜交瘤細胞．在細胞培養過程中，培養液中需要添加無機鹽，但要注意無機鹽的種類和數量（濃度），以保證生命活動的正常進行．（3）為選育出能產生高特異性抗體的細胞，要將從HAT培養基上篩選出的細胞稀釋到7～10個細胞/mL，每孔滴入0.1mL細胞稀釋液，其目的是使每個孔內不多于一個細胞，達到單克隆培養的目的（或單一細胞培養以保證抗體的純度）．（4）與一般的血清抗體相比，單克隆抗體的優點是特異性強、靈敏度高、可大量制備．（5）若用15N標記的氨基酸培養能產生單克隆抗體的細胞，單克隆抗體是分泌蛋白質，首先在核糖體中合成，在內質網上初步加工，之后內質網邊緣以“出芽”形式冒出囊泡，囊泡離開內質網，轉移到高爾基體上，與高爾基體膜融合，囊泡中的物質也進入到高爾基體中，在高爾基體中進一步加工成成熟的蛋白質，高爾基體膜也突起形成小泡，小泡離開高爾基體，轉移到細胞膜上，小泡中物質釋放到細胞膜外．因此，放射性物質在細胞結構中出現的先后順序是：核糖體、內質網、高爾基體、細胞膜． 所以答案是：（1）動物細胞培養、動物細胞融合；（2）篩選雜交瘤細胞 　種類和數量（濃度）；（3）使每個孔內不多于一個細胞，達到單克隆培養的目的（或單一細胞培養以保證抗體的純度）；（4）靈敏度高、特異性強；（5）核糖體、內質網、高爾基體、細胞膜
【考點精析】解答此題的關鍵在于理解單克隆抗體的制備的相關知識，掌握對免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴細胞；同時用動物細胞培養的方法培養骨髓瘤細胞并提取；促使它們細胞融合；在特定的選擇培養基上篩選出融合的雜種細胞；然后對它進行克隆化培養和抗體檢測；最后將雜交瘤細胞在體外做大規模培養或注射入小鼠腹腔內增殖，從細胞培養液或小鼠腹水中可得到大量的單克隆抗體．