Question

【題目】回答利用農桿菌轉化法培育轉基因植物的相關問題：

（1）培育轉基因植物過程的核心步驟是構建基因表達載體，其目的是使目的基因在受體細胞中 ， 并且可以通過復制遺傳給下一代，同時，使目的基因表達和發揮作用．
（2）構建基因表達載體時，可利用DNA連接酶連接被限制酶切開的 鍵．
（3）組成基因表達載體的單體是 ．基因表達載體中的啟動子是 識別和結合的部位，這種結合完成后才能驅動目的基因通過 （填過程）合成mRNA．
（4）用兩種限制酶XbaI和SacI（兩種酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，獲得含目的基因的片段．若利用該片段構建基因表達載體，應選用下圖中的何種Ti質粒？
（5）將受體細胞培養成植株需要應用 技術，該技術的理論依據是 ．

Answer 1

【答案】穩定存在；磷酸二酯；脫氧核苷酸；RNA聚合酶；轉錄；甲；植物組織培養；植物細胞的全能性
【解析】（1）構建基因表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以通過復制遺傳給下一代，同時，使目的基因表達和發揮作用．
（2）DNA連接酶的作用是在DNA片段之間形成磷酸二酯鍵．
（3）基因表達載體的本質是DNA，其基本組成單位是脫氧核苷酸；基因表達載體中的啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，這種結合完成后才能驅動目的基因通過轉錄合成mRNA．
（4）用兩種限制酶XbaI和SacI（兩種酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，獲得含目的基因的片段．
甲、該Ti質粒中含有限制酶XbaI和SacI的切割位點，且用這兩種酶切割可將目的基因插入T﹣DNA中，甲正確；
乙、該Ti質粒中不含限制酶SacI的切割位點，乙錯誤；
丙、該Ti質粒中含有限制酶XbaI和SacI的切割位點，但用這兩種酶切割不會將目的基因插入T﹣DNA中，丙錯誤；
丁、該Ti質粒中不含限制酶XbaI的切割位點，丁錯誤．
故選：甲．
（5）將受體細胞培養成植株需要應用植物組織培養技術，該技術的理論依據是植物細胞的全能性．
農桿菌轉化法（約80%的轉基因植物都是用這種方法獲得的）
1、農桿菌轉化法的具體過程：
（1）利用土壤的Ti質粒構建基因表達載體，即將目的基因整合到土壤農桿菌的Ti質粒上．
（2）將整合了目的基因的Ti質粒導入土壤農桿菌細胞內．
（3）利用土壤農桿菌感染植物細胞，該過程實際上是將含有目的基因的土壤農桿菌Ti質粒導入植物細胞內．
（4）含有目的基因的土壤農桿菌Ti質粒進入植物細胞后，可以把自己的一段基因整合到細胞核中的染色體上，這段基因中包含了目的基因．
2、原理：農桿菌中的Ti質粒上的T﹣DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T﹣DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．
3、農桿菌特點：易感染雙子葉植物和裸子植物，對單子葉植物沒有感染力；Ti質粒的T﹣DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體上．
4、轉化：目的基因插人Ti質粒的T﹣DNA上 農桿菌→導入植物細胞→目的基因整合到植物細胞染色體上→目的基因的遺傳特性得以穩定維持和表達．