Question

【題目】土壤有“微生物的天然培養基”之稱。下圖是某同學分離和培養土壤中微生物的部分操作步驟和實驗結果示意圖。回答下列問題：

（1）利用固體培養基培養土壤中的微生物時，除考慮各種營養條件外，還需要控制的培養條件有_____（至少寫兩點）等。接種前應該先檢測固體培養基是否被污染，檢測的具體方法是_____。

（2）圖示中用平板劃線法接種的操作順序是A→B→_____；以上操作步驟中存在明顯錯誤的是_____（用字母表示），該操作的正確方法是_____。

（3）實驗室利用平板劃線法來分離樣品中的目的菌時，每次劃線之前都要對接種環進行滅菌，目的是_____。在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線，這樣做的目的是_____。

Answer 1

【答案】溫度、pH、氧氣、無菌等 將未接種的培養基在適宜的環境中放置一段時間，觀察培養基上是否有菌落產生 E→D→C→F C 在酒精燈的火焰旁劃線 殺滅上次劃線接種環上殘留的菌種 使菌種的數目隨著劃線次數的增加而逐漸減少，最終能夠得到單菌落

【解析】

據圖圖示為平板劃線操作：①挑取土壤含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。②劃A區：將平板倒置于煤氣（酒精）燈旁，左手拿出皿底并盡量使平板垂直于桌面，有培養基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁），右手拿接種環先在A區劃3﹣4條連續的平行線（線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區后應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響后面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底并將其覆蓋在皿蓋上方（不要放入皿蓋內），以防止雜菌的污染。③劃其他區：將燒去殘菌后的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，并使B區轉到上方，接種環通過A區（菌源區）將菌帶到B區，隨即劃數條致密的平行線。再從B區作C區的劃線。最后經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。④等平板凝固后，將平板倒置。因此，正確的順序為A→B→E→D→C→F。

（1）若用該培養基培養土壤中的微生物時，除考慮各種營養條件外，還要考慮溫度、pH、氧氣、無菌等和滲透壓等條件。檢測固體培養基是否被污染的方法是：將未接種的培養基在適宜的環境中放置一段時間，觀察培養基上是否有菌落產生。

（2）圖示是平板劃線法接種操作示意圖，由以上分析可知，其操作順序是A→B→E→D→C→F；為了防止雜菌污染，接種應該在酒精燈的火焰旁進行，因此以上操作中存在錯誤的步驟是C

（3）平板劃線法操作時，次劃線之前都要對接種環進行滅菌，目的是殺滅上次劃線接種環上殘留的菌種。在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線，能夠使菌種的數目隨著劃線次數的增加而逐漸減少，最終能夠得到單菌落