Question

【題目】基因工程需要用到多種工具，質粒就是一種常見的工具——運載體，某一質粒載體如圖所示,外源DNA插入Ampr或Tetr中會導致相應的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環素抗性基因)。有人將此質粒載體用BamHⅠ酶切后,與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進行連接反應。

（1）用得到的混合物直接轉化大腸桿菌,結果可能將會得到___類大腸桿菌（大致類型，不進行數量、基因長度區分）。

（2）要篩選導入了含有目的基因的重組質粒的大腸桿菌，其特點是能抗_____而不能抗_____；要挑選出目的菌，必須在___（物理性質）培養基上進行。

（3）圖中的三個DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制性核酸內切酶的識別序列與切割位點,經BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與上述表達載體被______酶切后的產物連接,理由是_________。

（4）重組質粒導入動物細胞方法一般是______，最后該動物細胞生長發育為轉基因動物,進入泌乳期后,可以通過分泌乳汁來生產所需要的藥品,這些藥品的化學本質大多為。

Answer 1

【答案】 4（未被轉化、僅含有環狀目的基因、含有質粒載體、含有插入了目的基因的重組質粒） 氨芐青霉素 四環素 固體 Sau3AⅠ 兩種酶切割后產生的片段具有相同的黏性末端（或者產生的黏性末端能堿基互補配對） 顯微注射法 蛋白質

【解析】本題考查了基因工程的有關知識，要求考生能夠識記質粒作為運載體的條件，掌握目的基因檢測和鑒定的方法，再結合題干信息準確分析。

（1）用得到的混合物直接轉化大腸桿菌，結果大腸桿菌有的未被轉化，有的被轉化。被轉化的大腸桿菌有三種，分別是僅含有環狀目的基因、含有質粒載體、含有插入了目的基因的重組質粒。

（2）BamHⅠ酶會破壞四環素抗性基因，因此含有目的基因的重組質粒的大腸桿菌不能產生抗四環素物質，氨芐青霉素抗性基因沒有破壞，能產生抗氨芐青霉素物質，因此該大腸桿菌能抗氨芐青霉素而不能抗四環素。固體培養基一般用于分離微生物，因此要挑選出目的菌，必須在固體培養基上進行。

（3）分析圖解可知，限制酶Sau3AI和BamHI酶切割后形成的黏性末端相同，因此經BamHI酶切割得到的目的基因可以與表達載體被Sau3AI酶切后的產物連接。

（4）重組質粒導入動物細胞方法一般是顯微注射法，通過分泌乳汁來生產所需要的藥品的化學本質大多為蛋白質。