Question

【題目】SARS冠狀病毒（SARS-CoV）的N蛋白是一種重要的結構蛋白，位于病毒顆粒的核心部分，并與病毒RNA結合。在病毒的包裝等過程中起重要作用。因此制備抗SARS-CoVN蛋白的單克隆抗體（mAb），對于診斷和治療疾病具有重要意義。用SARS-CoV制備單克隆抗體的流程如下圖：

（1）為了獲得大量的SARS冠狀病毒N蛋白目的基因，可以采用PCR技術在體外擴增，該技術還需要dNTP、_______酶以及引物等，擴增三輪需要的引物數量為___________個。

（2）若雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，且在高于等電點的pH溶液中帶負電荷。利用瓊脂糖凝膠電泳進行分離和純化DNA分子主要依據_______不同，采用外加電場使其分開。在電泳槽中還需要加入______作為參照物進行鑒定。

（3）小鼠被抗原蛋白免疫后，可以從___________中獲取細胞Ⅰ。細胞Ⅰ中可能包含多種能產生抗體的細胞，原因是______________________。

（4）為了分離出只能產生mAb的細胞Ⅱ，需要用___________技術對雜交瘤細胞進行篩選。目前可將圖中的___________作為疫苗，預防SARS冠狀病毒引發的疾病。

Answer 1

【答案】Taq（耐高溫DNA聚合） 14 分子量（大小） 標準DNA 脾臟 小鼠曾經接觸過其他抗原 抗體檢測（抗原—抗體雜交） SARS冠狀病毒的N蛋白

【解析】

由圖可知，提取相關mRNA，通過逆轉錄過程可形成SARS冠狀病毒（SARS-CoV）的N蛋白的目的基因，將該目的基因構建基因表達載體后導入人胚肺成纖維細胞，在該細胞中生產SARS冠狀病毒（SARS-CoV）的N蛋白。將此蛋白注射到小鼠體內，可引起小鼠發生特異性免疫，產生能夠分泌與SARS冠狀病毒（SARS-CoV）的N蛋白結合的抗體的漿細胞，將此漿細胞與骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，經過培養和篩選可獲得能產生單一抗體的雜交瘤細胞，在體外培養該細胞，即可得到單克隆抗體（mAb）。

（1）PCR過程需要耐高溫的DNA聚合酶，即Taq酶，第一次循環要1對引物，第二次要2對，第三次需要4對，擴增三輪總共需要7對也就是14個引物。

（2）由于雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，且在高于等電點的pH溶液中帶負電荷。所以利用瓊脂糖凝膠電泳分離純化DNA主要是依據不同DNA的分子量不同，在電泳槽中還需要加入標準DNA作為參照物。

（3）小鼠被抗原蛋白免疫后，從產生免疫反應的小鼠的脾臟中獲取B淋巴細胞也就是細胞I。因為小鼠曾經接觸過其他抗原，所以細胞I可能包含多種能產生抗體的細胞。

（4）為了分離出只能產生mAb的細胞II，可用抗原抗體雜交技術對雜交瘤細胞進行篩選，目前可以將圖中的SARS冠狀病毒的N蛋白作為疫苗，預防SARS冠狀病毒引發的疾病。