Question

【題目】CAR-T 是一種免疫細胞療法，通過改造人體自身的免疫 T 細胞，實現對癌細胞精確化、個體化的治療。下圖是該療法的原理示意圖。請結合圖示，回答下列問題：

（1）該療法的第一步需要從患者機體采血，分離出 T 細胞，放入_____________ （儀器）中保溫培養。在培養過程中除了添加糖、氨基酸等必要的營養成分外，往往還添加動物血清，原因是 _________。

（2）然后，在體外利用一種樹突狀細胞（可以呈遞癌細胞抗原的一種吞噬細胞），將 T 細胞激活，使其增殖并分化為________ 。

（3）理論上，構建的基因組文庫中含有生物的 ______基因。在體外利用 DNA 重組技術，將編碼癌細胞抗原受體（AR）的基因插入到某種病毒的 DNA 中，使病毒作為 AR 的____________，在感染激活的 T 細胞時，將 AR 基因整合到 T 細胞的_____ 中。

（4）T 細胞表面嵌合了 AR，就成為 CAR-T 細胞，通常采用 ______________________ 技術檢測AR 基因是否在 T 細胞中轉錄成功。CAR-T 再經過必要的質量檢測，回輸至患者體內，該方法采用的是自身 T 細胞，而不用異體 T 細胞，其原因是______。

Answer 1

【答案】二氧化碳培養箱 動物血清營養成分比較齊全，可以彌補人工培養基的不足 記憶細胞和效應T細胞 全部 （運）載體 染色體DNA 分子雜交 避免（免疫）排斥反應

【解析】

1、基因文庫是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導入到受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因。基因組文庫包含某種生物所有的基因；部分基因文庫包含某種生物的部分基因，如：cDNA文庫。

2、基因表達載體的構建：①過程：用同一種限制酶切割目的基因和運載體，再用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子。②目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在并且可以遺傳給下一代并表達和發揮作用。③基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。

3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

5、動物細胞培養的條件：（1）無菌無毒的環境，可以進行滅菌處理和加入一定量的抗生素，定期更換培養液，避免代謝產物的積累；（2）營養條件：添加糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽和微量元素等，除外一般還需要添加血清、血漿等；（3）溫度和pH值（4）氣體環境：95%的空氣和5%的二氧化碳。

（1）分離出 T 細胞，進行動物細胞培養的過程應該將細胞放入二氧化碳培養箱中保溫培養。在培養過程中除了添加糖、氨基酸等必要的營養成分外，往往還添加動物血清或血漿等天然成分，因為動物血清營養成分比較齊全，可以彌補人工培養基的不足。

（2）根據題意，樹突狀細胞為可以呈遞癌細胞抗原的一種吞噬細胞，因此抗原經過吞噬細胞處理后呈遞給T細胞，引起T細胞的增殖與分化形成效應T細胞和記憶細胞。

（3）基因組文庫中含有某種生物的全部基因。在體外利用DNA 重組技術，將編碼癌細胞抗原受體（AR）的基因插入到某種病毒的DNA中，可見病毒作為AR的載體將其運輸到受體細胞（T細胞），導入受體細胞后將AR基因插入到T細胞染色體的DNA上。

（4）檢測目的基因是否轉錄，可以采用分子雜交法，即以AR基因作為探針與從受體細胞取出的總mRNA進行雜交，觀察有無雜交帶的出現即可。CAR-T 再經過必要的質量檢測，回輸至患者體內，該方法采用的是自身T細胞，而不用異體T細胞，以避免發生免疫排斥反應。