Question

【題目】為了增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，一起導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。

（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用__________法快速擴(kuò)增從陸地棉基因文庫中獲取到的酶D基因和從擬南芥基因文庫中獲取到的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因。所含三種限制酶（ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ）的切點(diǎn)如圖所示，則用______酶和______酶處理兩個(gè)基因后，可得到_____端與_____端（填圖中字母）相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入如圖所示Ti質(zhì)粒的T—DNA中，構(gòu)建_________________________并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含__________的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過程的目的是_______，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，該細(xì)胞通過________技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。

（4）用________技術(shù)可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)。

Answer 1

【答案】PCR ClaⅠ DNA連接 A D 基因表達(dá)載體（或“重組質(zhì)粒”） 四環(huán)素 利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞 植物組織培養(yǎng) 抗原-抗體雜交

【解析】

基因工程的基本操作程序：

第一步：目的基因的獲取

1、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成；

2、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因；

第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建

第三步：將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞

將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。

將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)；

將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞：用Ca2+處理。原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少，最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌。

第四步：目的基因的檢測(cè)和表達(dá)。

（1）目的基因的擴(kuò)增采用PCR技術(shù)；由于酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因都有ClaⅠ限制酶切位點(diǎn)，所以可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個(gè)基因后，得到A、D端相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞。該細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。

（4）用抗原-抗體雜交法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)。