Question

【題目】人乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸癌的發生密切相關，抗HPV的單克隆抗體可以準確檢測出HPV，從而及時監控宮頸癌的發生，以下是以HPV衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體的過程，請據圖回答：

（1）單克隆抗體制備過程中涉及的細胞工程技術有_____________________________。

（2）若要分析雜交瘤細胞中染色體，可通過解離、漂洗、___、制片等過程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察。雜交瘤細胞中染色體數目與普通淋巴細胞相比具有的特點是____，在HAT培養基上存活的細胞可能包括____（填下列序號）。

①無抗體分泌的細胞

②抗HPV抗體的分泌細胞

③其它無關抗體的分泌細胞

（3）對于抗體檢測呈____性的雜交克隆應盡早進行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細胞到3～10個/mL，每孔加入細胞稀釋液____mL（填“0.1”“1”或“10”），使每個孔內不多于一個細胞，達到單克隆培養的目的。

（4）由上述過程生產出的單克隆抗體不能直接用于人體，理由是__________________。

（5）科學家從某些無限增殖細胞的細胞質中分離出了無限增殖調控基因（prG），該基因能激發動物細胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更多的思路。除本題描述的一種制備單克隆抗體技術外，請再簡要寫出一種制備單克隆抗體的思路____________。

Answer 1

【答案】動物細胞培養、動物細胞融合 染色 染色體數目加倍 ①②③ 陽 0.1 小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，可引起免疫反應 通過基因工程向漿細胞中導入prG，利用核移植技術將漿細胞的細胞核移植到去核的無限增殖細胞中

【解析】

該實驗流程為：對小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產生免疫反應；得到相應的B淋巴細胞；將小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合，再用特定的選擇培養基進行篩選；在該培養基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜種細胞才能生長（這種雜種細胞的特點是既能迅速大量繁殖又能產生專一的抗體）；對上述雜交瘤細胞還需進行克隆化培養和抗體檢測，經多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細胞；最后，將雜交瘤細胞在體外條件下做大規模培養，或注射到小鼠腹腔內增殖，這樣，從細胞培養液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體。

（1）單克隆抗體制備過程中要將淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合為雜交瘤細胞，該技術為動物細胞融合技術，要培養雜交瘤細胞，需利用動物細胞培養技術。
（2）觀察細胞染色體制片流程：解離、漂洗、染色和制片。因為雜交瘤細胞含有淋巴細胞和骨髓瘤細胞的遺傳物質，故雜交瘤細胞中染色體數目與普通淋巴細胞相比具有的特點是染色體數目加倍。看圖分析可知：小鼠骨髓瘤細胞不能在HAT培養基上生長，但是沒有說能不能生存，只是不能增殖，正常細胞也能在HAT培養基上存活，故①無抗體分泌的細胞、②抗HPV抗體的分泌細胞、③其它無關抗體的分泌細胞都能在HAT培養基上存活，但是能夠增殖的只有雜交瘤細胞，故①②③都能存活。
(3)檢測后能夠產生抗HPV抗體即抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞要行克隆化，以便產生單克隆抗體。有限稀釋法因為稀釋細胞到3～l0個細胞/mL，故每孔加入細胞稀釋液0.1 mL，使每個孔內不多于一個細胞，達到單克隆培養的目的。
（4）因為小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，存在著排異反應，故由上述過程生產出的單克隆抗體不能直接用于人體。
（5）據題意，可以通過基因工程向漿細胞細胞核染色體DNA中導入prG，提取該漿細胞細胞核，和去核的無限增殖細胞融合為重組細胞，進行細胞培養產生單克隆抗體。