Question

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中和部分的運(yùn)輸。根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖（如圖），請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）凝膠色譜法中所用的凝膠大多數(shù)是由______________等多糖類化合物構(gòu)成的微小多孔球體。

（2）將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整；A為______________，B為______________。

（3）洗滌紅細(xì)胞次數(shù)過(guò)少會(huì)影響分離效果的原因是____________________________。

（4）在裝填色譜柱時(shí)不能有氣泡存在，因?yàn)?/span>____________________________，降低分離效果；如果____________________________，說(shuō)明色譜柱制作成功。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，SDS能與各種蛋白質(zhì)結(jié)合形成蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物，由于SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，從而使電泳的遷移率完全取決于____________________________。

Answer 1

【答案】葡聚糖或瓊脂糖 血紅蛋白的釋放 凝膠色譜柱的裝填 無(wú)法除去血漿蛋白 氣泡會(huì)擾亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序 紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng) 分子的大小

【解析】

血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白。（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)。（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

（1）凝膠色譜法中所用的凝膠大多數(shù)是由葡聚糖、瓊脂糖等多糖類化合物構(gòu)成的微小多孔球體。

（2）血紅蛋白的提取和分離流程為：紅細(xì)胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析→凝膠色譜柱的制作→凝膠色譜柱的裝填→樣品的加入和洗脫。可見(jiàn)，A表示血紅蛋白的釋放，B表示凝膠色譜柱的裝填。

（3）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白，以利于后續(xù)步驟的分離純化，洗滌次數(shù)過(guò)少，無(wú)法去除血漿蛋白，影響分離效果。

（4）由于氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果，所以在裝填凝膠色譜柱時(shí)，不得有氣泡產(chǎn)生。在蛋白質(zhì)分離過(guò)程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)，說(shuō)明色譜柱制作成功。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，SDS能與各種蛋白質(zhì)結(jié)合形成蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物，由于SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，從而使電泳的遷移率完全取決于分子的大小。