Question

（12分）為了解基因結構，通常選取一特定長度的線性DNA分子，先用一種限制酶切割，通過電泳技術將單酶水解片段分離，計算相對大小；然后再用另一種酶對單酶水解片段進行降解，分析片斷大小。下表是某小組進行的相關實驗。

已知一線性DNA序列共有5000bp（bp為堿基對）	第一步水解	產物 （單位bp）	第二步水解	產物 （單位bp）
A酶切割	2100	將第一步水解產物分離后，分別用B酶切割	1900   200
1400	800    600
1000	1000
500	500
B酶切割	2500	將第一步水解產物分離后，分別用A酶切割	1900   600
1300	800    500
1200	1000   200
經A酶和B酶同時切割	1900    1000    800    600    500    200

（1）該實驗設計主要體現了__________________原則。
（2）由實驗可知，在這段已知序列上，A酶與B酶的識別序列分別為______個和_____個。
（3）根據表中數據，請在下圖中標出相應限制性酶的酶切位點并注明相關片斷的大小。
（4）已知BamH Ⅰ與BglⅡ的識別序列及切割位點如下圖所示，用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數個BamH Ⅰ和BglⅡ識別序列的DNA分子進行反復的切割、連接操作，若干循環后“AGATCC//TCTAGG”和___________序列明顯增多，該過程中DNA連接酶催化_________鍵的形成。

Answer 1

（1）對照（單一變量）       　
(2)3    2
(3)

(4)GGATCT//CCTAGA　　磷酸二酯鍵解析:
考查基因工程知識。
（1）此實驗設計主要體現了對照原則，A酶與B酶對照。
（2）線性DNA經A酶切割后的片段共4個，所以切點有3個；經B酶切割后的片段有3個，所以切點有2個。
（3）從表格中用A酶和B酶水解后形成的片段的相鄰關系，可確定產物在DNA中的分布是
，再根據A酶或B酶單獨切割后形成的片段，可將A酶和B酶的切割位點找出，即

（4）BamH Ⅰ 切割后形成的黏性末端是和，  BgI Ⅱ切割后形成的黏性末端是 和AGATCC//TCTAGG是和拼接而成，另一個重組DNA片段則是和拼接而成，即為GGATCT//CCTAGA。