Question

【題目】白僵菌可感染農業害蟲，因而可用來防治農業害蟲。由于白僵菌對草丁膦（一種除草劑）敏感，且殺死害蟲的能力較弱，科研人員將Bar基因（抗除草劑基因）和毒蛋白基因導入白僵菌進行基因工程改造，流程如圖所示：

（1）從蘇云金芽孢桿菌中獲取的毒蛋白基因，通過PCR技術可在體外大量擴增。該擴增過程需要提供__________種引物，所需添加的酶是_______________。

（2）圖中形成重組質粒1時需要的限制酶是_____________；形成重組質粒2除了需要限制酶XbaⅠ外，還需要_____________酶。

（3）將重組質粒2導入經____________處理成為感受態的白僵菌，一段時間后用含有________的平板培養基進行篩選，獲得含有Bar基因的重組白僵菌。

（4）為了判斷重組白僵菌的殺蟲效果，科研人員接下來應該___________________。

Answer 1

【答案】 兩 耐熱的DNA聚合酶 NcoⅠ、BamHⅠ DNA連接 Ca2+ 草丁膦 將重組白僵菌噴涂在植物葉片上，再用此葉片飼喂害蟲，記錄單位時間內的害蟲死亡的數

【解析】試題分析：據圖分析，圖中首先利用NcoⅠ、BamHⅠ兩種限制酶切割目的基因和質粒，然后再用DNA連接酶形成重組質粒，利用兩種限制酶可以防止目的基因和質粒自身連接；然后再利用XbaⅠ酶分別切割重組質粒1和Bar基因，再構建重組質粒2。

（1）PCR技術擴增過程需要2種引物與兩條母鏈配對，并需要耐高溫的DNA聚合酶的催化。

（2）據圖分析，毒蛋白基因兩端是NcoⅠ、BamHⅠ作用位點，因此需要NcoⅠ、BamHⅠ將毒蛋白基因和質粒切割，然后再用DNA連接酶形成重組質粒l。形成重組質粒2的過程需要限制酶XbaⅠ和DNA連接酶。

（3）將重組質粒2與用鈣離子處理后處于感受態的白僵菌菌液混合進行轉化，一段時間后用含有草丁膦的平板培養基進行篩選，獲得含有Bar基因的重組白僵菌。

（4）科研人員將重組白僵菌噴涂于植物葉片上，以此飼喂饑餓處理的害蟲，記錄單位時間內的死亡害蟲數，以判斷重組白僵菌的殺蟲效果。