Question

【題目】科研人員利用基因工程、細胞工程、胚胎工程等培育出了乳汁中含有人凝血因子Ⅸ醫用蛋白的二倍體轉基因綿羊，簡易流程如圖所示。請回答下列問題：

（1）圖中①過程為基因工程的核心步驟，該步驟用到的工具有_____________。該步驟得到的“A”中應具有一些特殊的DNA片段，其中_____________用于②過程。

（2）進行圖中③過程前，卵母細胞要進行去核處理的原因是__________________________。

（3）為了獲得綿羊胎兒的單個成纖維細胞，_________（填“能”或“不能”）使用胃蛋白酶處理綿羊組織塊，理由是_________________________。

（4）圖中④過程所用培養液的成分比較復雜，除一些無機鹽和有機鹽，還需添加_____________（答出三種即可）。

（5）在進行圖中⑤過程前_________（填“需要”或“不需要”）進行性別鑒定，理由是_____________。

Answer 1

【答案】 限制酶、DNA連接酶、載體 標記基因 保證二倍體轉基因綿羊的核遺傳物質全部來自含有目的基因的成纖維細胞 不能 胃蛋白酶的最適pH為2.0左右，在接近中性的環境中胃蛋白酶基本沒有活性 維生素、激素、氨基酸、核苷酸、動物血清 不需要 胎兒成纖維細胞來自雌綿羊，最終獲得的轉基因綿羊均為雌性

【解析】試題分析：根據圖中能分泌人凝血因子Ⅸ醫用蛋白的二倍體轉基因綿羊的培育流程分析，①為目的基因（人凝血因子Ⅸ基因）構建的基因表達載體，②為鑒定篩選含目的基因的成纖維細胞，③為含目的基因的細胞（核）與去核卵細胞形成重組細胞，④表示利用早期胚胎培養技術培養重組胚胎，⑤是通過胚胎移植技術完成對早期胚胎的移植。據此分析各小題：

（1）圖中①過程為基因表達載體的構建，涉及對載體的切割和目的基因與載體的連接，所以該步驟用到的工具有限制酶、DNA連接酶、載體。該步驟得到的“A”即構建的基因表達載體，為了便于鑒定并篩選受體細胞（成纖維細胞）是否含有目的基因，需要在構建的重組載體中含有標記基因。

（2）為了保證③過程得到的重組細胞中含有的核遺傳物質全部來自二倍體轉基因綿羊，所以對移植用的卵母細胞要進行去核處理。

（3）為了獲得綿羊胎兒的單個成纖維細胞，應該用胰蛋白酶或膠原蛋白酶對綿羊組織塊進行處理，而不能使用胃蛋白酶處理，因為胃蛋白酶的最適pH為2.0左右，它在接近中性的環境中胃蛋白酶基本沒有活性；如果將處理環境的pH變為2.0，則獲得的成纖維細胞的生理活性又會受到嚴重影響。

（4）圖中④過程是早期胚胎的培養過程，除一些無機鹽和有機鹽外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸和動物血清等。

（5）根據子代個體的性別由重組細胞核內性染色體決定，由于該重組細胞的細胞核來自于雌性綿羊的體細胞，所以細胞內含有XX性染色體組成，最終發育的轉基因綿羊一定是雌性，所以在進行圖中⑤胚胎移植前不需要進行性別鑒定。