Question

【題目】目前，精子載體法逐漸成為最具誘惑力的制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物方法之一，該方法以精子作為外源基因的載體，使精子攜帶外源基因進(jìn)入卵細(xì)胞受精．如圖表示利用該方法制備轉(zhuǎn)基因鼠的基本流程．請據(jù)圖回答：

（1）獲取外源基因用到的工具酶是_____，為了提高實(shí)驗(yàn)成功率，通常利用_____技術(shù)獲得大量標(biāo)記的外源基因。

（2）外源基因能夠整合到精子的_____上是提高轉(zhuǎn)化率的關(guān)鍵，因?yàn)槭芫珪r(shí)只有精子的_____才能進(jìn)入卵細(xì)胞中。

（3）過程②采用的是_____技術(shù)，該過程中應(yīng)對已經(jīng)導(dǎo)入外源基因的精子進(jìn)行_____處理。

（4）過程③需要在_____（至少寫出兩點(diǎn)）等條件下進(jìn)行．由于人們對動(dòng)物細(xì)胞所需營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需在培養(yǎng)基中加入一定量的_____。

（5）為了獲得更多的早期胚胎，常用_____激素對供體進(jìn)行處理，使其_____，從而獲得更多的卵母細(xì)胞。

Answer 1

【答案】限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶） PCR 染色體 頭部（細(xì)胞核） 體外受精 獲能 無菌無毒、適宜的溫度和PH、營養(yǎng)充足、氣體環(huán)境 動(dòng)物血清（或血漿） 促性腺 超數(shù)排卵

【解析】

1、分析圖可知，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將目的基因?qū)�入到成熟精子的染色體中，再通過體外受精作用將目的基因移入到受精卵中，再通過早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植，最終獲得轉(zhuǎn)基因鼠。①過程是轉(zhuǎn)化目的基因進(jìn)入精子的染色體上，②過程是體外受精，③過程是早期胚胎培養(yǎng)，④過程是胚胎移植。

2、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因（適用于目的基因的核苷酸序列已知的情況）。PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，其原理是DNA復(fù)制，需要模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），以指數(shù)的方式擴(kuò)增，即約2n，可以在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因。

（1）獲取目的基因時(shí)，需要限制酶切割。為了提高實(shí)驗(yàn)成功率，可以通過PCR擴(kuò)增技術(shù)，在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因。

（2）精子與卵細(xì)胞受精時(shí)，精子的頭部進(jìn)入卵細(xì)胞中，并釋放其細(xì)胞核進(jìn)入卵細(xì)胞，但細(xì)胞質(zhì)未進(jìn)入。為了提高轉(zhuǎn)化率，必須將外源基因整合到精子的染色體中，才可以使外源基因進(jìn)入受精卵中。

（3）②過程是攜帶外源基因的精子與卵細(xì)胞發(fā)生體外受精，形成受精卵。精子必須獲能才可以與卵細(xì)胞發(fā)生受精作用。

（4）受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)液成分一般都比較復(fù)雜，除了含有各種無機(jī)鹽、有機(jī)鹽類、維生素、氨基酸、核苷酸、激素等外，還要添加動(dòng)物血清（或血漿）等物質(zhì)。

（5）卵母細(xì)胞的采集可以用促性腺激素作用于雌性動(dòng)物，使其超數(shù)排卵，從而獲取較多的卵母細(xì)胞。