Question

【題目】基礎知識檢測

（1）繪制單克隆抗體的制備流程，標明重要的步驟名稱。（_______）

（2）補充繪制完整第一輪PCR過程：補充各步驟名稱和溫度、繪制第一輪的產(chǎn)物；繪制第二輪PCR結束后所有產(chǎn)物分子（標出引物A和引物B的位置和5＇、3＇方向）。（______）

Answer 1

【答案】

【解析】試題分析：單克隆抗體的制備流程可以參考課本中圖解流程進行文字化表述。PCR技術的步驟：（1）DNA變性(90℃-96℃)：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA；（2）退火(復性)(40℃-65℃)：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈；（3）延伸(68℃-75℃)：在taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下，以dNTP為原料，從引物的5′端→3′ 端延伸，合成與模板互補的DNA鏈。每一循環(huán)經(jīng)過變性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。

（1）給動物注射特定抗原→提取已免疫的B淋巴細胞

提取同種動物的骨髓瘤細胞→誘導二者融合為雜交細胞→篩選并克隆化培養(yǎng)既能迅速增殖，又能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞→進行體外培養(yǎng)雜交瘤細胞或者植入動物體內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細胞→提取所需的單克隆抗體。

（2）結合前面的分析可知，由于DNA的兩條鏈是反向的，在引物結合與延伸時，二者也表現(xiàn)為方向是相反的。根據(jù)已知圖解中兩條模板鏈上結合的引物位置為起點，第一輪：以5′端→3′端為模板鏈的子鏈延伸方向為從右向左；以3′端→5′端為模板鏈的子鏈延伸方向則是從左向右。第二輪：以原母鏈的兩條鏈為模板的引物結合部位和延伸方向與第一輪相同，以第一輪得到的含引物A的子鏈為模板則在另一端結合引物B從左向右延伸，而以第一輪得到的含引物B的子鏈為模板則在另一端結合引物A從右向左延伸（見參考答案圖示）