Question

【題目】淀粉酶是工業生產上用途最廣、產量最大的酶制劑產品之一。為了提高淀粉酶的生產水平，首先要從土壤中篩選出產淀粉酶的活性菌株。某研究人員對所取土樣進行產淀粉酶的細菌的分離操作(A 組)和計數操作(B 組)，過程如圖Ⅰ。請回答下列問題：

（1）步驟①取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要__________(填操作)，步驟④ 所用培養基的碳源是__________；步驟⑤所用固體培養基的制備步驟是計算→_________→溶化→ 滅菌→倒平板；步驟⑤⑧接種時需設置未接種培養基做對照，目的是_________。

（2）步驟⑦中，將 1mL 菌液分別稀釋 10 倍和 100 倍，每種稀釋度經過步驟⑧各在 3 個平板上接種(每個平板的接種量為 0.1mL)，經適當培養后，2 組平板上的菌落數分別為59、57、58 和 2、7、5。據此可得出每升菌液中的活菌數為_________個。

（3）圖Ⅱ所用的接種方法_________(填“能”或“不能”)對活菌進行計數；甲、乙、丙為劃線的三個區域，為正確完成整個接種過程，接種環至少進行________次灼燒滅菌。

Answer 1

【答案】滅菌 淀粉 稱量 檢測培養基是否被污染 5.8×106 不能 4

【解析】

1、培養基的制備流程：計算→稱量→溶解→調pH值→融化瓊脂→濾裝→包扎標記→滅菌→擺斜面或倒平板

2、微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

（1）在微生物培養過程中，獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌入侵，因此步驟①取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要嚴格滅菌處理，根據題意可知，該操作過程是從土壤中篩選出產淀粉酶的活性菌株，因此步驟④所用培養基為選擇培養基，故所用的碳源是以淀粉為唯一碳源；根據培養基的配制流程：計算→稱量→溶解→調pH值→融化瓊脂→濾裝→包扎標記→滅菌→擺斜面或倒平板；步驟⑤⑧接種時需設置未接種培養基做對照，目的檢測檢測配制的培養基是否合格，即是否有雜菌污染。

（2）稀釋涂布平板法中，一般選用30―300個菌落數進行計數，因此采用稀釋10倍和100倍的菌落數分別為59、57、58 和 2、7、5的進行計算，據此可得出每升土壤溶液中的活菌數為：（59+57+58）÷3×10×（0.1×10-3）=5.8×106個。

（3）識圖分析可知，圖Ⅱ所用的接種方法為平板劃線法，用該方法可以將微生物分離獲得單個菌落，但是不能對活菌進行計數；圖中甲、乙、丙為劃線的三個區域，說明進行了三次劃線操作，接種過程中接種環首先要進行灼燒滅菌，冷卻后沾取菌種進行第一次劃線，然后在灼燒接種環，冷卻后在第一次劃線的末端開始第二次劃線，以此類推，因此為正確完成整個接種過程，接種環至少進行4次灼燒滅菌。