Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題。

（一）回答與果酒及果醋制作有關的問題：

（1）葡萄酒的自然發酵過程中，菌種的來源主要是附在葡萄皮上的野生型酵母菌。要篩選得到純凈的酵母菌種，首先要配置培養基，配好后應置于壓力鍋內加熱一段時間，以達到____________目的。加熱結束后，不能立刻開鍋，否則培養基會____________。在固體培養基上劃線分離時，單菌落會出現在__________。在上述篩選過程中，不該出現的操作是____________。

（2）下圖裝置中彎曲的安全玻璃管可以讓瓶中的二氧化碳氣體排出，還可以____________。為了制作酒精含量較高（體積分數約為15%）、糖含量也較高的葡萄酒，可以向果汁中加入適量____________。

（3）果醋發酵過程中，隨著發酵的進行，乙醇含量逐漸下降，這是由于醋桿菌在____________和酸性環境下將乙醉氧化為醋酸。

（二）基因敲除是針對某個序列己知但功能未知的基因，改變其基因結構，令該基因功能喪失，從而對生物體造成影響，進而推測出該基因功能的一門技術。以下是制備APOE 基因敲除小鼠的常規過程：

備注：neo基因是抗新霉素的抗藥基因；APOE是指載脂蛋白E，參與脂蛋白的代謝與轉化。

請回答：

（1）為了獲得APOE基因，可以用____________或者PCR擴增。過程②中所需的工具酶有__________。Nco基因除了破壞APOE基因外，還具存的作用最可能是____________。

（2）培養小鼠胚胎干細胞時，首先要在培養皿底部制備飼養層，用于飼養層的細胞—般是__________。經過⑥克降以后的細胞的后裔細胞辟稱為純系，細胞純系的特點是____________，從而便于研究。

（3）純合的APOE基因敲除小鼠____________（能/不能）表達APOE，與正常小鼠相比表現出 ____________性狀。

Answer 1

【答案】 滅菌 溢出（噴出） 劃線的末端 C 減少氧氣和雜菌進入 蔗糖 有氧（充氧） 化學方法合成 限制性核酸內切酶和DNA連接酶 作為標記基因，便于篩選 胚胎成纖維細胞 遺傳性狀均一，表現的性狀相似 不能 脂蛋白的代謝和轉化異常

【解析】本題綜合考查果酒和果醋的制作、微生物接種操作、基因工程及其應用、胚胎干細胞培養等知識，要求考生能利用所學知識解讀題干和圖形信息，進行分析、推理和判斷，進而回答相關問題，此題綜合性較強，但難度一般。

（一）（1）葡萄酒的自然發酵過程中，菌種的來源主要是附在葡萄皮上的野生型酵母菌。要篩選得到純凈的酵母菌種，首先要配置培養基，配好后應置于壓力鍋內加熱一段時間，以達到滅菌目的。加熱結束后，不能立刻開鍋，否則培養基會溢出（噴出）。在固體培養基上劃線分離時，單菌落會出現在劃線的末端。在上述篩選過程中，不該出現的操作是C，即不能手持培養皿直接用酒精燈火焰給培養皿加熱。

（2）圖示裝置中彎曲的安全玻璃管可以讓瓶中的二氧化碳氣體排出，還可以減少氧氣和雜菌進入，有利于酵母菌無氧呼吸。為了制作酒精含量較高（體積分數約為15%）、糖含量也較高的葡萄酒，可以向果汁中加入適量蔗糖。

（3）果醋發酵過程中，隨著發酵的進行，乙醇含量逐漸下降，這是由于醋桿菌在有氧（充氧）和酸性環境下將乙醉氧化為醋酸。

（二）（1）為了獲得APOE基因（目的基因），可以用化學方法合成或者PCR擴增。過程②是形成重組質粒的過程，該過程中所需的工具酶有限制性核酸內切酶和DNA連接酶。Nco基因除了破壞APOE基因外，還具存的作用最可能是作為標記基因，便于篩選出能在含新霉素的培養基中生長的受體細胞。

（2）培養小鼠胚胎干細胞時，首先要在培養皿底部制備飼養層，用于飼養層的細胞—般是胚胎成纖維細胞。經過⑥克降以后的細胞的后裔細胞群稱為純系，細胞純系的特點是遺傳性狀均一，表現的性狀相似，從而便于研究。

（3）純合的APOE基因敲除小鼠由于APOE基因結構被破壞，因而不能表達APOE，由于APOE參與脂蛋白的代謝與轉化，因此與正常小鼠相比APOE基因敲除小鼠會表現出脂蛋白的代謝和轉化異常性狀。