Question

【題目】如圖為三種質(zhì)粒和一個含目的基因的片段的示意圖．圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割的位點與復(fù)制原點的距離，1Kb=1000個堿基對長度．請據(jù)圖回答：
（1）質(zhì)粒A、C不能作為目的基因運載體的理由分別是、 ．
（2）將圖中的目的基因與質(zhì)粒B進行重組，需要用到酶．如果是兩兩重組，可能有種長度的重組結(jié)果．
（3）基因工程中檢測篩選含有目的基因的重組質(zhì)粒是一個重要的步驟．現(xiàn)運用酶切質(zhì)粒，完全酶切后進行電泳觀察，若出現(xiàn)長度為1.1kb和kb，或者kb和kb的片段，則可以判斷該質(zhì)粒已與目的基因重組成功（重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點與EcoRⅠ的識別位點之間的堿基對忽略不計）．

Answer 1

【答案】
（1）缺少標記基因；復(fù)制原點被限制酶切割
（2）限制酶（PvuⅠ）和DNA連接酶；3
（3）EcoRⅠ；5.6；3.1；3.6
【解析】解：（1）由圖可知，質(zhì)粒A中缺少標記基因，質(zhì)粒C中的復(fù)制原點被酶切割，所以A、C不能作為運載體．（2）由圖可知，獲取目的基因使用的限制酶是PvuⅠ，所以切割質(zhì)粒B也用該限制酶，同時目的基因與運載體連接的時候還需要DNA連接酶．用DNA連接酶連接時，可能出現(xiàn)質(zhì)粒環(huán)化、目的基因環(huán)化、形成重組質(zhì)粒，有3處長度的結(jié)果．（3）根據(jù)題意，質(zhì)粒長度為2.7kb，目的基因長度為4.0kb，所以重組質(zhì)粒長度為6.7kb，出現(xiàn)長度為1.1kb，則另一個長度為5.6kb，若目的基因重組時倒置，可形成3.1kb和3.6kb的片段． 故答案為：（1）缺少標記基因 復(fù)制原點被限制酶切割（2）限制酶（PvuⅠ）和DNA連接酶 3（3）EcoRⅠ5.6 3.1 3.6
基因表達載體由啟動子、終止子、標記基因和目的基因組成．
基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．1、限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．2、DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．