Question

【題目】某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍光激發下會發出綠色熒光，這一特性可用于檢測細胞中目的基因的表達。某科研團隊將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5′末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱為甲）作目的基因，并將其插入質粒P0，構建了真核表達載體P1，其部分結構和酶切位點的示意圖如下，圖中E1~E4四種限制酶產生的黏性末端各不相同。回答下列問題：

（1）據圖推斷，該團隊在將甲插入質粒P0時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是_________。使用這兩種酶進行酶切是為了保證_______________的完整性，啟動子能與_______特異性結合驅動轉錄開始。

（2）將P1轉入體外培養的牛皮膚細胞后，若在該細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了________和_________過程。

（3）為了獲得含有甲的牛，該團隊需要做的工作包括：將能夠產生綠色熒光細胞的_____________移入牛的____________中、體外培養、胚胎移植等。

（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細胞中，某同學用PCR方法進行鑒定。在鑒定時應分別以該牛不同組織細胞中的_________（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。

Answer 1

【答案】E1和E4 甲 RNA聚合酶 轉錄 翻譯 細胞核 去核卵母細胞 核DNA

【解析】

目的基因的獲取方法：基因文庫獲取，PCR，人工合成。

基因工程常用的工具：限制酶、DNA連接酶、運載體。

（1）甲是L1-GFP融合基因，需要插入到質粒中啟動子和終止子之間且不能破壞自身的完整性，由圖可知，應該選擇E1和E4進行切割，啟動子是RNA聚合酶結合的位點，啟動轉錄。

（2）熒光蛋白基因表達才會出現綠色熒光，故若在該細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了基因表達過程，即完成了轉錄和翻譯過程。

（3）要獲得含熒光的牛，應該通過核移植技術把能夠產生綠色熒光的細胞核移入去核的卵母細胞中，獲得重組細胞，再經過早期胚胎培養及胚胎移植，即可獲得含有甲的牛。

（4）由于基因的選擇性表達，同一基因在不同細胞的表達情況不同，要檢測不同細胞中是否含目的基因，不能選擇RNA進行鑒定，而應該獲取DNA進行檢測，另外PCR的模板是DNA不是RNA。