Question

【題目】下圖所示為農桿菌轉化法示意圖。據圖請回答下列問題：

（1）基因工程的基本原理是____。要獲得圖中的重組質粒過程用到的3種工具的本質是____（填“都是蛋白質”或“蛋白質或核酸”或“都是核酸”）。

（2）圖中外源基因的黏性末端的形成與___ 酶的作用有關，基因工程中所用的目的基因可以是____，也可以從____中獲得。

（3）為使外源基因在此植物細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的外源基因片段正確插入表達載體的____之間。

（4）圖中表示基因工程最核心步驟的是____（寫數字）；在基因表達載體中，標記基因的作用是_____。

Answer 1

【答案】基因重組 蛋白質或核酸 限制性核酸內切 人工合成 基因文庫 啟動子和終止子 ② 便于重組載體（目的基因表達載體）的鑒定和篩選

【解析】

（1）獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取、 ②利用PCR技術擴增、 ③人工合成（化學合成）。原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成。

（2）DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體。

（3）目的基因的檢測與鑒定，常用基因探針——用放射性同位素（或熒光分子）標記的含有目的基因DNA片段。Ⅰ、分子水平上的檢測： ①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA——分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質——抗原—抗體雜交技術；Ⅱ、個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）基因工程利用的基本原理是基因重組。圖中重組質粒用到的工具包括限制性核酸內切酶、DNA連接酶和運載體質粒，前兩者本質是蛋白質，后者是核酸。

（2）用同種限制性核酸內切酶切割質粒和目的基因露出相同的黏性末端。目的基因的獲取方法包括從基因文庫中獲取和PCR技術擴增。

（3）基因表達載體包括啟動子、終止子、目的基因和標記基因，啟動子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端。

（4）基因工程最核心的步驟是表達載體的構建，即圖中的②。表達載體上的標記基因用于重組載體（目的基因表達載體）的鑒定和篩選。