Question

【題目】他莫昔芬（Tamoxifen）是治療乳腺癌的常用藥物，然而長期服用容易引起耐藥性。牛樟芝（AC）是一種傳統的藥用蘑菇提取物，科研人員用AC處理Tamoxifen抗性的乳腺癌細胞（MCF-7tamR），發現其可以緩解Tamoxifen的耐藥性，相關研究如下，請回答問題：

（1）乳腺癌發生的根本原因是外界致癌因子引起了________突變。

（2）科研人員在不同條件下培養MCF-7tamR細胞，分別于24h、48h測定細胞增長率，結果如圖1所示。

①體外培養MCF-7tamR細胞時，培養基中除水、糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、促生長因子外，通常還需要加入______和抗生素；傳代培養時，貼滿瓶壁的細胞需要用_____等處理后分瓶繼續培養。

②分析圖1結果，依據__________，可知AC和Tamoxifen聯合使用對于MCF-7tamR細胞的治療效果最好。

（3）Skp2和RhoA是乳腺癌細胞中兩種關鍵酶，前者抑制細胞凋亡，后者影響細胞代謝。兩種酶是基因通過___________過程指導合成的蛋白質。

（4）為進一步探明AC的作用機理，研究人員從100μg/ml AC處理24h的MCF-7tamR細胞中獲取mRNA，逆轉錄得到cDNA后，特異性擴增skp2和RhoA基因的片段，進行電泳檢測。結果如圖2所示。

①β-actin基因在不同細胞中轉錄水平相對穩定，且表達量較高，在實驗中可消除______等無關變量對實驗結果的影響，常用作參照基因。

②由實驗結果可知，AC抑制了細胞中Skp2、RhoA基因的_______過程。據此推測AC的作用機制可能是__________。

Answer 1

【答案】原癌基因和抑癌基因 血清 胰蛋白酶 聯合使用AC和Tamoxifen時的細胞增長率，比單獨使用AC和Tamoxifen時低 轉錄和翻譯 檢測方法 轉錄 抑制Skp2、RhoA基因表達，促進MCF-7 tamR細胞凋亡，影響細胞代謝

【解析】

根據題意，AC可緩解Tamoxifen的耐藥性，根據表格中數據，比較Tamoxifen組、AC100μg/ml組、AC100μg/ml+Tamoxifen組對細胞增長率的影響，24h和48h的細胞增長率為：Tamoxifen組﹥AC100μg/ml組﹥AC100μg/ml+Tamoxifen組；比較Tamoxifen組、AC150μg/ml組、AC150μg/ml+Tamoxifen組對細胞增長率的影響，24h細胞增長率為：Tamoxifen組﹥AC150μg/ml組≈AC150μg/ml+Tamoxifen組；48h細胞增長率為：Tamoxifen組﹥AC150μg/ml組﹥AC150μg/ml+Tamoxifen組；且48h細胞增長率AC100μg/ml+Tamoxifen組﹥AC150μg/ml+Tamoxifen組，說明施加AC確可緩解Tamoxifen的耐藥性且該效應與濃度有關，據此分析。

（1）乳腺癌發生的根本原因是外界致癌因子引起了原癌基因和抑癌基因突變。

（2）①體外培養MCF-7tamR細胞時，培養基中除水、糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、促生長因子外，通常還需要加入血清和抗生素；傳代培養時，貼滿瓶壁的細胞需要用胰蛋白酶等處理后分瓶繼續培養。

②分析圖1結果，聯合使用AC和Tamoxifen時的細胞增長率，比單獨使用AC和Tamoxifen時低，說明AC和Tamoxifen聯合使用對于MCF-7tamR細胞的治療效果最好。

（3）Skp2和RhoA是乳腺癌細胞中兩種關鍵酶，前者抑制細胞凋亡，后者影響細胞代謝。兩種酶是基因通過轉錄和翻譯過程指導合成的蛋白質。

（4）①β-actin基因在不同組細胞中轉錄水平相對穩定，且表達量較高，在實驗中可消除檢測方法等無關變量對實驗結果的影響，常用作參照基因。

②由實驗結果可知，AC組細胞擴增出的Skp2、RhoA基因片段幾乎沒有，說明未獲取得到相關mRNA，推測AC抑制了細胞中Skp2、RhoA基因的轉錄過程。據此推測AC的作用機制可能是抑制Skp2、RhoA基因表達，從而促進MCF-7 tamR細胞凋亡，從而影響細胞代謝。