Question

【題目】人外周血單核細胞能合成白細胞介素2（IL－2）。該蛋白可增強機體免疫功能，但在體內易 被降解。研究人員將1L－2基因與人血清白蛋白（HAS）基因拼接成一個融合基因，并在酵母菌中表達，獲得具有1L－2生理功能、且不易降解的1L－2－HSA融合蛋白，其技術流程如圖。請回答：

（1）圖中③過程的模板是_______。表達載體1中的位點________應為限制酶Bg1Ⅱ的識別位點，才能成功構建表達載體2。

（2）表達載體2導入酵母菌后，融合基因轉錄出的mRNA中，與1L－2蛋白對應的堿基序列不能含有____________，才能成功表達出IL－2－HSA融合蛋白。 啟動子是__________識別和結合的部位，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA。

（3）培養人外周血單核細胞時，需要將溫度控制在___________℃，此外還需要通入__________（氣體）。

（4）應用_____________技術可檢測酵母菌是否表達出IL－2－HSA融合蛋白。

（5）如果基因表達載體2導入的是優質奶牛的受精卵細胞，經胚胎培養后移入受體母牛子宮內可以存活的生理學基礎是 ________________。

Answer 1

【答案】 IL-2的cDNA a 終止密碼子 RNA聚合酶 37 無菌的95%空氣和5%CO2 抗原抗體雜交 母牛子宮對外來胚胎基本上不發生免

【解析】據圖分析，①表示轉錄提取信使RNA，②表示逆轉錄形成目的基因，③表示PCR擴增技術。（1）PCR技術擴增的原理是DNA復制原理，所以該過程的模板與其產物相同，即IL-2的cDNA。根據目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達載體1也必須有這兩個酶切位點，表達載體1上已有EcoRⅠ，推測位點a應含有BglⅡ。（2）融合基因轉錄出的mRNA中與1L－2蛋白對應的堿基序列不能含有終止密碼子，才能成功表達出IL－2－HSA融合蛋白，否則HAS不能合成。啟動子是RNA聚合酶的識別并結合的部位。（3）動物細胞培養所需要的條件是：95%空氣和5%CO2氣體環境、適宜溫度（37℃）和PH、無毒無菌的環境及合適的營養成分，其培養基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分。（4）檢測蛋白質常常用抗原—抗體雜交技術。（5）胚胎培養后移入受體母牛子宮內可以存活的生理學基礎是發情期母牛子宮對外來胚胎基本上不發生避免排異反應反應。