Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細胞(ES細胞)對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：

(1)Rag2基因表達的場所最可能在___________(填寫器官)

(2)步驟②中，重組胚胎培養到___________期時，可從___________分離出ES細胞。

(3)步驟③中，需要構建含有基因Rag2的表達載體。可以利用___________擴增Rag2基因片段。用 HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有___________和___________的酶切位點。

(4)為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的______________________，用___________進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】骨髓或胸腺 囊胚 內細胞團 pcr 技術 HindⅢ PstⅠ 蛋白質 Rag2蛋白的抗體

【解析】

圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養過程，③表示采用基因工程技術將目的基因導入受體細胞。

1、動物核移植的概念：將動物的一個細胞的細胞核移入一個去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發育為動物個體。

2、胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內細胞團）。

3、在基因工程中，目的基因和質粒需要用同種限制酶進行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質粒。

4、目的基因分子水平上的檢測：

①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術。

②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術。

③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。

（1）Rag2基因表達的場所最可能在骨髓或胸腺。

（2）內細胞團位于囊胚中，所以步驟②中，重組胚胎培養到囊胚期時，可從其內細胞團分離出ES細胞。

（3）步驟③中，利用pcr技術擴增Rag2基因片段。基因工程中構建基因表達載體時，應用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，若用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段，則為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點。

（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細胞的蛋白質（抗原），用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。