Question

【題目】蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步:樣品處理→粗分離→純化→純度鑒定，每一種蛋白質(zhì)的分離純化方法因其來源和性質(zhì)的不同會(huì)有很大差異。回答下列有關(guān)提取和分離血紅蛋白的問題:

(1)在樣品處理過程中，首先要洗滌紅細(xì)胞，目的是________，以利于后續(xù)步驟的分離純化。在重復(fù)洗滌過程中，用的洗滌液是____。紅細(xì)胞破碎后，通過離心法將血紅蛋白從混合液中分離出來，圖是分離結(jié)果示意圖，其中_____(填圖中序號(hào))是血紅蛋白，若圖分層不明顯，分析其原因是________________________。

(2)對(duì)血紅蛋白進(jìn)行凝膠色譜操作屬于上述步中的______。此步驟中凝膠色譜柱的制作是關(guān)鍵，若制作過程中出現(xiàn)以下兩種現(xiàn)象則需要重新裝填凝膠色譜柱:①________________，②________________________。

(3)為進(jìn)一步提高凝膠色譜操作分離出的血紅蛋白的度，可采用__________的方法。

Answer 1

【答案】去除雜蛋白（或去除粘在紅細(xì)胞上的血漿蛋白） 生理鹽水 ③ 洗滌次數(shù)過少，未能除去血漿蛋白 純化 色譜柱內(nèi)出現(xiàn)氣泡 洗脫液流干，露出凝膠顆粒 電泳

【解析】

本題考查血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生獨(dú)立完成“生物知識(shí)內(nèi)容表”所列的生物實(shí)驗(yàn)，包括理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒃�理、方法和操作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并將這些實(shí)驗(yàn)涉及的方法和技能進(jìn)行綜合運(yùn)用的能力。

（1）因血液中的紅細(xì)胞表面粘有血漿蛋白，因此需用生理鹽水反復(fù)沖洗以去除雜蛋白，若沖洗不徹底或洗滌次數(shù)過少，未能除去血漿蛋白時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致離心分層時(shí)各種成分分離不明顯；紅細(xì)胞破碎經(jīng)離心處理后，可得圖示結(jié)果，其中③為血紅蛋白；

（2）通過凝膠色譜法可以分離相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)，屬于上述流程中的純化環(huán)節(jié)；此步驟要注意凝膠的裝填要緊密、均勻，若出現(xiàn)①色譜柱內(nèi)出現(xiàn)氣泡或②洗脫液流干，露出凝膠顆粒時(shí)的情況時(shí)，則需要重新裝填凝膠色譜柱；

（3）電泳可進(jìn)一步提高凝膠色譜操作分離出的血紅蛋白的純度。

步驟	操作
樣品處理	通過細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液等操作收集到血紅蛋白溶液
粗分離	通過透析法去除血紅蛋白溶液中的相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)
純化	通過凝膠色譜法分離相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)
純度鑒定	SDS——聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求