Question

【題目】根據基因工程的有關知識，回答下列問題：

（1）限制性內切酶切割ＤＮＡ分子后產生的片段，其末端類型有______和_____。

（2）質粒運載體用EcoRⅠ切割后產生的片段如下：

為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內切酶切割，該酶必須具有的特點是_____________________。

（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即_____DNA連接酶和_______DNA連接酶。

（4）反轉錄作用的模板是________，產物是_______。若要在體外獲得大量反轉錄產物，常采用_________技術。

（5）基因工程中除質粒外，_____和______也可作為運載體。

（6）若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是___________________________________。

Answer 1

【答案】（1）黏性末端 平末端

（2）切割產生的DNA片段末端與EcoRI切割產生的相同

（3）大腸桿菌 T4

（4）mRNA（或RNA） cDNA（或DNA） PCR

（5）噬菌體 動植物病毒

（6）未處理的大腸桿菌吸收質粒（外源DNA）的能力極弱

【解析】試題分析：（1）經限制性核酸內切酶切割后能形成兩種類型的末端，即平末端和黏性末端．

（2）為了便于相連，兩種不同限制酶切割之后所產生的黏性末端必須相同．

（3）DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T4DNA連接酶．這二者都能連接黏性末端，此外T4DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時的效率比較低．

（4）反轉錄是以mRNA為模板逆轉錄先合成單鏈DNA，再合成雙鏈DNA，利用PCR技術進行大量擴增．

（5）基因工程常用的運載體：質粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．

（6）當受體細胞是細菌時，為了增大導入的成功率，常用Ca2+處理，得到感受態細胞，此時細胞壁和細胞膜的通透性增大，容易吸收重組質粒．未處理的大腸桿菌吸收質粒（外源DNA）的能力極弱．

故答案為：（1）黏性末端 平末端

（2）切割產生的DNA片段末端與EcoRI切割產生的相同

（3）大腸桿菌 T4

（4）mRNA（或RNA） cDNA（或DNA） PCR

（5）噬菌體 動植物病毒

（6）未處理的大腸桿菌吸收質粒（外源DNA）的能力極弱