Question

【題目】回答下列（一）、（ニ）兩小題。

（一）請回答釀酒、泡菜腌制、泡菜汁中嗜鹽微生物分離實驗以及亞硝酸鹽測定的有關問題。

（1）家庭釀制米酒時，將米飯與酒曲混合裝壇約占______的空間。酒曲中含有的曲霉可將米飯中的營養物質水解，從而有利于酵母菌進行細胞呼吸，請列舉出酒曲中可能存在的酶(至少2種)：____________。

（2）泡制過程中起主要作用的微生物是_________和__________。

（3）分離計數嗜鹽微生物所用的接種工具是__________。根據培養基的用途，分離實驗選用___________。判斷該培養基是否起了作用，需要設置的對照組是____________。

A．未接種的該培養基 B．未接種的LB培養基

C．接種了的LB培養基 D．接種了的該培養基

（4）測定亞硝酸鹽含量時，對25g樣品進行適當處理后定容至500mL，取10 mL樣品溶液顯色后，用光程為1cm的________在550nm處測定光密度值，繪制以亞硝酸鹽質量為橫坐標，以光密度值為縱坐標的_______

（二）2012年諾貝爾生理學或醫學獎授予在“體細胞重編程”領域做出貢獻的科學家，如圖是將鼠的皮膚細胞“重新編程”為多功能干細胞，再導入早期胚胎，植入代孕鼠，產出嵌合體鼠的過程。請回答下列有關問題：

（1）4個關鍵基因(山中因子)作為______________通過逆轉錄病毒轉入小鼠的皮膚細胞內，使其轉變成iPS細胞。在該技術中，逆轉錄病毒是這4個關鍵基因的________，在其協助下4個基因進入細胞內，并整合到其染色體的_______上。

（2）培養iPS細胞時，培養液需要特別加入的天然成分是________，iPS細胞通過________(填字母)方法注入早期胚胎中。

A．細胞融合 B．顯微注射　C．胚胎移植 D．核移植

（3）早期胚胎通常要培養到________才能進行移植，要使一個早期胚胎最終形成若干個基因型相同的嵌合體鼠，需要采用________的技術。

Answer 1

【答案】2/3 淀粉酶、糖化淀粉酶、蛋白酶等 假絲酵母 乳酸菌 玻璃刮刀 選擇培養基（或者高鹽的LB培養基） C 比色杯 標準曲線 目的基因 載體 DNA 動物血清(或胎牛血清) B 8細胞以上(或桑椹胚或囊胚) 胚胎分割

【解析】

1、測定亞硝酸鹽含量是利用光電比色法，對比待測溶液和標準溶液的吸光度來測定待測溶液的濃度。利用亞硝酸鹽在鹽酸酸化下與對氨基苯磺酸發生重氮反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸結合形成玫瑰紅色，該樣品的吸光度是比較待測溶液中亞硝酸鹽含量的標準。

2、基因工程中的運載體：常用的運載體：質粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒。

3、胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內細胞團）。特點：具有胚胎細胞的特性，體積較小，細胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發育的全能性，可分化為成年動物任何一種組織細胞。另一方面，在體外培養條件下，ES細胞可不斷增殖而不發生分化，可進行冷凍保存，也可以進行某些遺傳改造。

（一）（1）酵母菌屬于兼性厭氧型生物，家庭釀制米酒時，將米飯與酒曲混合裝壇約占2/3的空間，酒曲中含有的曲霉可將米飯中的營養物質水解，從而有利于酵母菌進行細胞呼吸，同時酒曲中還含有蛋白酶、淀粉酶等。

（2）假絲酵母菌和乳酸菌在泡菜在腌制過程中起主要作用。

（3）分離計數嗜鹽微生物所用的接種工具是玻璃刮刀；該實驗需要分離嗜鹽微生物，故分離培養基應當選用含鹽量高的選擇培養基，同時用接種了的LB培養基判斷是否起到了篩選作用。

（4）由于亞硝酸鹽在鹽酸酸化下與對氨基苯磺酸發生重氮反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸結合形成玫瑰紅色，故測定亞硝酸鹽含量采用光電比色法，樣品需要放在1cm比色杯中測定，在繪制曲線時，以光密度值為縱坐標的標準曲線。

（二）（1）目的基因主要指編碼蛋白質的基因，結合題意可知，山中因子在基因工程中指目的基因，基因工程中常用病毒作為運載體，在其協助下4個基因進入細胞內，并整合到其染色體的DNA上。

（2）將目的基因導入動物細胞的方法是顯微注射法，由于早期胚胎培養動物血清中含有細胞生長所必需的物質，所以在體外培養胚胎時需要加入動物血清。

（3）早期胚胎通常要培養到桑椹胚或囊胚階段才能進行移植，要使一個早期胚胎最終形成若干個基因型相同的嵌合體鼠，需要采用胚胎分割技術。