Question

【題目】內皮素（ET）是一種含21個氨基酸的多肽，具有強烈的血管收縮和促進平滑肌細胞增殖等作用，其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯系．內皮素（ET）主要通過與靶細胞膜上的ET受體（ETA）結合而發揮生物學效應．科研人員通過構建表達載體，實現ETA基因在大腸桿菌細胞中的高效表達，其過程如下圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaI的識別序列為 ， 限制酶XhoI的識別序列為 ． 請據圖分析回答：

（1）進行過程①時，需要加入緩沖液、引物、脫氧核苷酸和 酶等．完成過程①②③的目的是 ．
（2）過程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA，使 鍵斷開，形成的黏性末端是 ．用兩種限制酶切割獲得不同的黏性末端，其主要目的是
（3）構建的重組表達載體，目的基因上游的啟動子是 的部位，進而可驅動基因的轉錄．除圖中已標出的結構外，基因表達載體還應具有的結構是
（4）過程⑥要CaCl2預先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的 細胞．
（5）將SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，其目的是有利于檢測
（6）基因工程操作時可將外源基因整合到葉綠體基因組中，不僅能有效改良植物的品質．還由于葉綠體轉基因不會隨（“花粉”或“卵細胞”）傳給后代，從而在一定程度上避免轉基因作物中的外源基因能擴散到其他同類作物．

Answer 1

【答案】逆轉錄酶；獲取目的基因（ETA基因）；磷酸二酯鍵；；使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環化；RNA聚合酶識別和結合的部位，驅動基因的轉錄；復制原點、終止子；感受態；檢測ETA基因能否表達及表達量；花粉
【解析】解：（1）過程①以mRNA合成目的基因，所以需要加入緩沖液、原料、逆轉錄酶和ATP和引物等．過程①②③表示反轉錄法獲得目的基因的過程．
（2）過程③和⑤利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過程，限制酶使得DNA的磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是 ． 圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，可以使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環化．
（3）目的基因上游的啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結合的部位，驅動基因的轉錄，除圖示結構外，完整的基因表達載體還應具有復制原點、終止子等結構．
（4）過程⑥中，要用CaCl2預先處理大腸桿菌，使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態的細胞．
（5）利用SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，目的是檢測ETA基因能否表達及表達量．
（6）基因工程操作時可將外源基因整合到葉綠體基因組中，不僅能有效改良植物的品質．還由于葉綠體轉基因不會隨花粉傳給后代，從而在一定程度上避免轉基因作物中的外源基因能擴散到其他同類作物．
【考點精析】認真審題，首先需要了解基因工程的原理及技術(基因工程的原理是利用DNA重組技術)．