Question

【題目】下圖是從酵母菌獲取某植物需要的某種酶基因的流程，結合所學知

識及相關信息回答下列問題：

（1）圖中cDNA文庫 基因組文庫（填“大于”、“等于”或者“小于”）。

（2）①過程提取的DNA需要 的切割，B過程是 。

（3）為在短時間內大量獲得目的基因，可用 擴增的方法。目的基因獲取之后，需要進行 ，其組成必須有 以及標記基因等，此步驟是基因工程的核心。

（4）將該目的基因導入某雙子葉植物細胞，常采用的方法是 ，其能否在此植物體內穩定遺傳可以用 技術進行檢測。

Answer 1

【答案】（1）小于 （2）限制酶 反轉錄

（3）PCR技術 基因表達載體的構建 啟動子、終止子、目的基因（復制原點可不答）

（4）農桿菌轉化法 DNA分子雜交

【解析】

1、基因文庫是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導入到受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因。包括基因組文庫（包含某種生物所有的基因）和部分基因文庫（包含某種生物的部分基因，如cDNA文庫）。

2、PCR技術擴增目的基因（適用于目的基因的核苷酸序列已知的情況）。PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術，其原理是DNA復制，需要模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶），以指數的方式擴增，即約2n。

3、基因表達載體的構建是基因工程的核心。目的是使目的基因在受體細胞中穩定存在并且可以遺傳給下一代并表達和發揮作用。基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。

4、將目的基因導入受體細胞，如受體細胞是植物細胞，常用農桿菌轉化法（約80%的轉基因植物都是用這種方法獲得的），具體過程：目的基因插人Ti質粒的T-DNA上→農桿菌→導入植物細胞→目的基因整合到植物細胞染色體上→目的基因的遺傳特性得以穩定維持和表達。另外，還可用基因槍法和花粉管通道法；如果受體細胞是動物細胞，常用顯微注射技術；如果受體細胞是微生物細胞，用Ca2+處理細胞→感受態細胞→表達載體與感受態細胞混合（在緩沖液中）→一定溫度下，感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化。

（1）基因組文庫是指將某生物的全部基因組DNA切割成一定長度的DNA片段克隆到某種載體上形成的集合；而cDNA文庫是由mRNA經逆轉錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達，所以來自所以cDNA文庫小于基因組文庫。

（2）從供體細胞中的DNA中獲取目的基因，首先應用限制酶將目的基因從其所在的DNA分子上切割下來；B過程是以mRNA為模版來合成DNA的，應為反轉錄（或逆轉錄）過程。

（3）PCR技術是一種體外擴增DNA的方法，其原理為DNA復制，能將得到的目的基因在細胞外大量擴增；目的基因獲取之后，需要進行基因表達載體的構建；其組成必須有目的基因、啟動子和終止子以及標記基因等，此步驟是基因工程的核心。

（4）將目的基因導入某雙子葉植物細胞常采用的方法是農桿菌轉化法，目的基因只有整合到植物細胞的染色體上才能在植物體內穩定遺傳，可通過DNA分子雜交的方法對目的基因是否整合到染色體上進行檢測。