Question

【題目】我國擁有自主知識產權的Bt毒蛋白抗蟲棉，某水稻研究中心嘗試運用農桿菌轉導法培育Bt毒蛋白抗蟲水稻，其過程如圖所示�；卮鹣铝袉栴}：

（1）一般情況下單子葉植物不能利用農桿菌轉導法，原因是______________�？茖W家在添加乙酰丁香酮后，可利用農桿菌將目的基因導入水稻的愈傷組織中，水稻幼胚愈傷組織在基因工程中是作為___________。

（2）獲取Bt毒蛋白基因后可利用_________技術擴增Bt毒蛋白基因。表達載體除了Bt毒蛋白基因、潮霉素磷酸轉移酶基因（可抗潮霉素）外，還必須有__________。

（3）要將表達載體轉入農桿菌內，需用________處理農桿菌，使之成為感受態細胞。要獲取幼胚愈傷組織，在培養基中除一定的營養物質以外，還需要___________。

（4）為了檢測水稻的DNA上是否插入了Bt毒蛋白基因，需要使用DNA探針做標記進行DNA分子雜交，該DNA探針由_________________組成。

（5）若要驗證該轉基因水稻是否具有抗蟲性，需進行__________________________。

Answer 1

【答案】農桿菌對單子葉植物無感染能力 受體細胞 PCR 啟動子 終止子 Ca2+ 激素 用放射性同位素標記Bt毒蛋白基因 抗蟲的接種實驗，檢測抗蟲性

【解析】

基因工程的基本操作程序

1、目的基因的獲�。海�1）原核基因采取直接分離獲得；（2）真核基因是人工合成；（3）PCR技術擴增目的基因；

2、基因表達載體的構建；

3、將目的基因導入受體細胞。

常用的轉化方法：

（1）將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是農桿菌轉化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。

（2）將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是 顯微注射技術．此方法的受體細胞多是受精卵．

（3）將目的基因導入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉化方法是：先用 Ca2+處理細胞，使其成為 感受態細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。

4、目的基因的檢測和表達

（1）由于農桿菌對單子葉植物沒有感染力，所以一般情況下單子葉植物不能利用農桿菌轉導法，水稻幼胚愈傷組織在基因工程中作為受體細胞接受目的基因。

（2）目的基因的擴增可用PCR技術，表達的載體組成是目的基因+啟動子+終止子+標記基因，Bt毒蛋白基因是目的基因、潮霉素磷酸轉移酶基因是標記基因，所以還需要啟動子和終止子。

（3）要將細菌處理成感受態細胞，需要用Ca2+，處理微生物，愈傷組織的培養，除了一定的營養物質以外，還需要植物激素（生長素和細胞分裂素）。

（4）DNA探針做標記進行DNA分子雜交的原理是堿基互補配對，所以探針是用放射性同位素標記Bt毒蛋白基因。

（5）驗證該轉基因水稻是否具有抗蟲性，需要進行抗蟲的接種實驗，檢測抗蟲性。