Question

【題目】（1）用限制酶BamHI和BclI（識別序列和切割位點如圖A所示）聯合切開長度為2.8kb（1 kb = 1000對堿基）的pul基因，并將之與BamHI打開的質粒（如圖B所示）粘連拼接，那么所獲得的重組質粒（每個質粒分子含單個pul基因）用BamHI和EcoRI聯合酶切，可產生長度分別為__________kb的片段或者長度分別為________________kb的片段。

（2）上述重組質粒與大腸桿菌受體細胞混合進行導入操作，之后還需要篩選，這是因為_________________________________________________。

（3）上述含重組質粒的大腸桿菌細胞進行大規模培養可獲得普魯蘭酶產品，在工業化應用之前可先進行提純及固定化處理，這個過程在生物工程中稱為___________，其目的和原理是___________（填下列選項）。

A．使普魯蘭酶不溶于水，因為支鏈淀粉不溶于水

B．使普魯蘭酶重復使用，因為酶在反應前后性質不變

C．使普魯蘭酶更趨穩定，因為蛋白質固定化后不易被降解

D．使普魯蘭酶活性更高，因為蛋白結構在固定化后往往會改變

Answer 1

【答案】1.4、6.8 kb 4.0、4.2 kb 重組質粒導入概率很低 酶工程 B

【解析】

限制酶BamHI和BclI切開pul基因，BamHI打開的質粒，連接的時候存在兩種情況，正接和反接。且由圖A可知，BclI切開的黏性末端與BamHI打開的黏性末端的連接產物不能在被限制酶BamHI識別。故重組質粒有兩種，5.4（含BamHI和EcoRI酶切位點）+2.8或者是4.0+（1.4+2.8）（BamHI和EcoRI酶切位點）。

（1）根據以上分析可知，用BamHI和EcoRI聯合酶切，可產生長度分別為1.4kb、5.4-1.4+2.8=6.8kb的片段或者長度分別為5.4-1.4=4.0kb、2.8+1.4=4.2kb的的片段。

（2）上述重組質粒與大腸桿菌受體細胞混合進行導入操作，之后還需要篩選，這是因為重組質粒導入成功的概率很低。

（3）上述含重組質粒的大腸桿菌細胞進行大規模培養可獲得普魯蘭酶產品，在工業化應用之前可先進行提純及固定化處理，這個過程在生物工程中稱為酶工程，其目的和原理是使普魯蘭酶重復使用，因為酶在反應前后性質不變，故選B。