Question

【題目】下圖是轉基因小鼠的培育過程示意圖，是綠色熒光蛋白基因，請分析回答:

（1）過程①需要用到 酶。過程②將目的基因導人胚胎干細胞常用的方法是 。培養胚胎干細胞的培養液中除加人各種營養物質外，通常還需加入 。

（2）表達載體包含綠色熒光蛋白基因、 、 、終止子和復制原點等。

（3）自然狀況下胚胎干細胞是由動物的早期胚胎或 中分離出來的一類細胞胚胎干細胞在形態上表現為體積小，細胞核大，細胞核仁明顯;在功能上具有 性。

（4）圖中載體上的基因是B抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418是B抗生素（對細胞有毒害作用），培養液添加G418的目的是 。

（5）圖中步驟⑤要將細胞注射入囊胚的 位置;步驟⑥胚胎移植前要對代孕母鼠用激素處理，目的是 。

（6）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，可從小鼠c體內提取蛋白質，用 雜交的方法加以檢測。

Answer 1

【答案】

（1）DNA連接酶 顯微注射法 血清

（2）標記基因 啟動子

（3）早期胚胎或原始性腺 發育的全能

（4）篩選出導入目的基因的胚胎干細胞

（5）內細胞團 同期發情處理

（6）抗原-抗體雜交

【解析】

（1）構建表達載體時，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和運載體，還需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組質粒，目的基因導人胚胎干細胞常用的方法是顯微注射法，體外培養胚胎干細胞時，通常要加入血清等天然成分，除了保證被培養細胞處于無菌、無毒及充足氧氣的環境中，還需要保證細胞生活所需適宜的溫度和pH。

（2）表達載體包含目的基因（綠色熒光蛋白基因Gfp）、標記基因、啟動子、終止子和復制原點等。

（3）胚胎干細胞來自于早期胚胎或原始性腺，早期胚胎或原始性腺屬于全能性細胞。

（4）步驟③所用的G418是一種抗生素，其作用是篩選出導入目的基因的胚胎干細胞。

（5）囊胚包括滋養層細胞和內細胞團細胞，其中滋養層細胞將發育成胎盤和胎膜，而內細胞團細胞將發育成各種組織，因此圖中步驟⑤要將細胞注射入圖中囊胚的內細胞團位置；圖中步驟⑥胚胎移植前要對代孕母鼠用激素處理，目的是同期發情處理。（1）限制性核酸內切酶、DNA連接酶 標記基因 啟動子

（2）篩選出導入目的基因的胚胎干細胞

（3）早期胚胎或原始性腺

（4）內細胞團 同期發情處理

（5）抗原-抗體雜交

（6）從分子水平上檢測小鼠是否存在綠色熒光蛋白，可采用抗原-抗體雜交法。