Question

根據模擬制作重組DNA分子的活動，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可獲得所需的目的基因和質粒，回答以下問題：（已知EcoRI酶識別序列為GAATTC，識別位點為G||A）

（1）綠色硬紙板（甲DNA分子）的堿基序列為：      

……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……     

……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……

紅色硬紙板（乙DNA分子）的堿基序列為：

  ……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……      

……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……      

其中，           DNA分子含有“目的基因”，            DNA分子是“質粒”。

（2）用剪刀代表進行切割。酶切位點在         （a處還是b處），此化學鍵稱為              。

（3）請用“||”在甲、乙兩DNA分子上標出EcoRI的作用位點。

    

（4）從基因文庫中獲取目的基因是常用方法，基因文庫實際上就是指導入了某種生物不同基因的許多DNA片斷的                         的群體。按照其中所含基因的量又可分為               文庫和              文庫。

（5）基因表達載體的構建是基因工程的關鍵步驟之一，請根據所給的條件完成下列問題：

     已知有4種限制性核酸內切酶，其中1號和4號切割DNA后產生的是平末端，2和3號酶產生的是黏性末端。含目的基因的DNA片段和質粒的酶切序列如下圖所示：

 

 

① 請設計酶切方案，構建最佳基因表達載體（重組質粒）                                                                     。

②該重組質粒上有幾個復制原點：    ，能用PCR技術擴增嗎      （能或不能）

③若用酶2和3切割重組質粒，可以得到幾個DNA片段：         。

  若用酶2和1切割重組質粒，可以得到幾個DNA片段：         。

Answer 1

（1）乙，   甲．  

（2）a處，     磷酸二酯鍵

（3） 綠色硬紙板（DNA分子甲）的堿基序列為：（2分）

 ……ATAGCATGCTATCCATG|| AATTCGGCATAC……

  ……TATCGTACGATAGGTACTTAA||GCCGTATG……

紅色硬紙紙（DNA分子乙）的堿基序列為：

  ……TCCTAG||AATTCTCGGTATG||AATTCCATAC……

  ……AGGATCTTAA||GAGCCATACTTAA||GGTATG……

   （4）受體菌     基因組       部分基因

   （5) ①目的基因：用酶2和4切割，質粒用酶1和2切割，由于1和4切出的是平末端，可以相連，因而目的基因可以與質粒重組。

②一個   不能

③2個   1個