Question

【題目】自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谘芯课⑸�物時(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問題。步驟如下：

（1）制備稀釋倍數(shù)范圍為__________________________的系列稀釋液。

（2）下圖中A、B兩種接種方法，常用來統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)目的方法是[ ]_______________________。

（3）適宜溫度下培養(yǎng)。

①為測(cè)定大腸桿菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是____________。

A.一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是23

B.兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是22和26，取平均值24

C.三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、5和52，取平均值26

D.四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、30、24和25，取平均值25

②一同學(xué)在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.05mL）________________________。

Answer 1

【答案】103-107 A稀釋涂布平板法 D 4.68108

【解析】

微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

1、平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的菌落。

2、稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，微生物被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。

（1）制備稀釋倍數(shù)范圍為103、104、105、106、107的系列稀釋液。

（2）由A圖可知，菌落隨機(jī)分布在培養(yǎng)基表面，故圖中A表示的是稀釋涂布平板法。由B圖可知，從第1區(qū)域到第5區(qū)域菌落數(shù)逐漸減少，故圖中B表示的是平板劃線法。其中，常用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)目，即圖中的A。

（3）①為了避免偶然性因素的影響，使結(jié)果接近真實(shí)值，應(yīng)設(shè)置三個(gè)或三個(gè)以上的平板，計(jì)算出菌落平均。A中只有一個(gè)平板，B中只有兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果不可信，AB錯(cuò)誤。計(jì)算時(shí)，明顯偏離實(shí)際值（可參照本組實(shí)驗(yàn)其他平板的計(jì)數(shù)值）的應(yīng)舍棄后再求平均值，C中菌落數(shù)為5和52的平板明顯偏離實(shí)際值，應(yīng)舍棄，舍棄后只剩下一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果不可信，C錯(cuò)誤；D中四個(gè)平板上的菌落數(shù)相差不大，且沒有明顯偏離實(shí)際值，故D的統(tǒng)計(jì)結(jié)果可信，D正確。

②每毫升樣品中的菌落數(shù)=C/V×M=23.4÷0.05×106=4.68108個(gè)。